Products
El Viral Vector Lysis Kit está concebido para su uso en aplicaciones de biología molecular. Este producto no está concebido para el diagnóstico, la prevención ni el tratamiento de enfermedades.
Características
- La solución en un kit y un protocolo para la lisis de AAV permite la normalización y el control de calidad (CC) de los flujos de trabajo actuales
- Medición coherente y reproducible de los títulos virales para varios serotipos (p. ej., serotipos AAV)
- Flujo de trabajo completo combinado con QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays y medición exacta de los títulos de AAV con el QIAcuity Digital PCR System
Detalles del producto
El virus adenoasociado es un vector viral ampliamente usado en aplicaciones de terapia génica. Sin embargo, el proceso de generación y purificación de los vectores virales requiere un preciso control de calidad para permitir una dosificación segura y fiable durante los estudios clínicos o el cuidado de los pacientes. La capacidad para cuantificar con exactitud los títulos del vector, así como determinar si existe contaminación, es la clave para aplicar terapias génicas basadas en AAV seguras y eficaces.
Con la introducción del CGT Viral Vector Lysis Kit, que incluye reactivos para 100 o 1000 reacciones, ahora disponemos de un flujo de trabajo optimizado y normalizado para la lisis del vector viral a través de una forma exacta y precisa de determinar el título viral. El kit también es compatible con adenovirus.
Rendimiento
Ofrecemos un flujo de trabajo completo, desde la lisis del AAV hasta la cuantificación del título viral a partir de lisados celulares. El CGT Viral Vector Lysis Kit, con su fórmula mejorada, proporciona una determinación coherente, robusta y exacta del título final. Trabajando en conjunto con los QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays, el QIAcuity Digital PCR System, QIAcuity Probe PCR Kit y QIAcuity Nanoplate 8.5K, ofrecen un flujo de trabajo de dPCR de principio a fin comparable al de la qPCR, pero proporcionando una cuantificación absoluta de las copias del genoma del vector AAV en su muestra.
Principio
La solución todo en uno para lisis de AAV proporciona:
- Normalización de la lisis de AAV con la implementación de procedimientos normalizados de trabajo (PNT) y control de calidad (CC) mucho más sencillos
- Cuantificación coherente de títulos
- Amplio intervalo de detección de entre 2,5 copias/µl y 15 000 copias/µl en QIAcuity Nanoplate 8.5k
- Robustez con un coeficiente de variación (CV) <10 % entre operadores y ensayos
El CGT Viral Vector Lysis Kit, junto con los QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays y celular y el QIAcuity Probe PCR Kit que realizan reacciones únicas o múltiples en los instrumentos QIAcuity, ofrece ahora un flujo de trabajo completo de título viral.
El principio de la reacción de dPCR en las nanoplacas se describe aquí.
Procedimiento
El CGT Viral Vector Lysis Kit se suministra con reactivos para 100 o 1000 reacciones en dos cajas para vectores AAV. El kit es apto para la lisis de AAV2, AAV5, AAV6, AAV8 y AAV9. Los lisados están optimizados para los QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays en combinación con el QIAcuity Probe PCR Kit. Estos ensayos permiten aplicaciones de terapia celular y génica tanto únicas como múltiples, incluidas mediciones de títulos virales y número de copias del vector. El kit no incluye las enzimas de restricción (p. ej., Hpall) que se indican en el protocolo (incluido en la sección Recursos a continuación).
Aplicaciones
El CGT Viral Vector Lysis Kit se utiliza para la lisis de AAV y adenovirus para un rango de aplicaciones, incluidas las mediciones de títulos genómicos del vector viral y número de copias del vector.
Datos y cifras de respaldo
La digestión ITR mejora la cuantificación de los blancos ITR y no ITR
Se procesaron dos muestras AAV2 con el CGT Viral Vector Lysis Kit y se cuantificaron con el instrumento QIAcuity Digital PCR con 8500 nanoplacas y los CGT dPCR Assays. Los CGT dPCR Assays se utilizaron en reacciones triplex en los canales FAM, HEX y Cy5. Las muestras se diluyeron en serie en 6 pasos desde 15 000 copias/µl hasta 2,5 copias/µl con un R2=1,0 en 8500 nanoplacas (A, B). Cada dilución se midió por triplicado técnico. Las cuantificaciones se realizaron con (+) y sin (–) digestión de restricción de las regiones ITR. (A) Para la valoración de una muestra estándar de referencia de AAV2 purificada, se utilizaron los CGT dPCR Assays dirigidos al potenciador de CMV y las regiones bGH polyA. Las copias previstas se basan en una estimación del ITR determinada por las mediciones de qPCR del proveedor del estándar de referencia y no son directamente comparables con las mediciones de dPCR. (A) Para la valoración de una muestra de extracción AAV2-SV40, se utilizaron los CGT dPCR Assays dirigidos al promotor de SV40, las regiones SV40 polyA y bGH polyA.
Recursos
Scientific Posters (3)
Kit Handbooks (1)
Brochures & Guides (1)
Application Notes (2)
Quick-Start Protocols (2)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
FAQ
Do you have to use a restriction enzyme to relieve ITR secondary structures and increase target accessibility?
Do you need to dilute the lysates before setting up the PCR mix?
Do I need to use Proteinase K in the CGT Viral Vector Lysis Kit? What is the recommended concentration?
Is the kit compatible with unpurified in-process samples?
Can I use the lysate from the CGT Viral Vector Lysis kit and combine it with another PCR system?
How do I know if the CGT dPCR assays are compatible with the sample DNA of interest?
Are the CGT dPCR assays also compatible with qPCR?
Is it possible to store the lysates? How can the lysates be stored?
Can I use MspI or HpaII restriction enzymes from other suppliers?
How many AAV genome copies can I load into the QIAcuity?
Can the CGT Viral Vector Lysis kit be used with assays of other suppliers or custom designed assays?
What is the recommended HpaII concentration?
Do you recommend storage of highly diluted AAV samples?