dPCR LNA Mutation Assays

• El diseño de ensayo doble permite detectar secuencias mutadas y nativas
• Opción de combinación de colorantes fluorescentes FAM + HEX o Atto 550 + ROX
• Los cebadores y las sondas mejorados con LNA aumentan la especificidad y la sensibilidad del ensayo
• Ensayos de dPCR probados en laboratorios experimentales disponibles para más de 200 blancos
• Ideal para su uso con ADN tumoral circulante, biopsia líquida, FFPE y otras muestras de tejido
• Destinado a utilizarse con el QIAcuity MasterMix

Los dPCR LNA Mutation Assays permiten detectar mutaciones de secuencias individuales seleccionadas a partir de amplias bases de datos seleccionadas, como COSMIC. Los diseños de los ensayos se han probado en laboratorios experimentales de dPCR y los datos resultantes se encuentran a disposición. La sensibilidad para detectar la mutación del blanco es de 0,1 % en un entorno nativo en un pocillo de una QIAcuity Nanoplate. Es posible alcanzar una sensibilidad superior al dividir la reacción en varios pocillos y combinar el análisis. La opción de dos combinaciones de colorante fluorescente diferentes permite detectar secuencias mutantes y nativas, además del análisis de multiplexado de dos mutaciones de blanco en un pocillo.

Los ensayos se encuentran disponibles en formato de tubo, como un ensayo con concentración 30×, listo para usar, que consta de dos cebadores y sondas para tipos mutantes y nativos. Los dPCR LNA Mutation Assays se utilizarán con el QIAcuity MasterMix.

La dPCR permite una mayor sensibilidad en la detección y la cuantificación absoluta de eventos/variantes de secuencia poco frecuentes, lo que permite detectar la presencia de una mutación en el 0,1 % en el entorno del ADN genómico nativo. La división en partes permite aumentar la concentración específica del blanco. La amplificación y detección de punto final por encima del ruido, con una calificación del blanco positiva/negativa binaria permite una cuantificación precisa, que es independiente del rendimiento de amplificación (causado, por ejemplo por los inhibidores de PCR).

Los dPCR LNA Mutation Assays son ensayos de hidrólisis doble basados en sonda que permiten identificar la presencia de secuencias de mutación específicas. Una sonda detecta el alelo mutante y la otra sonda detecta el alelo nativo. La PCR digital proporciona el método más sensible y fiable para detectar una secuencia de ADN mutante en un entorno nativo. Los dPCR LNA Mutation Assays usan cebadores y sondas mejorados con LNA, que aumentan la especificidad y la sensibilidad del ensayo, lo que permite detectar una mutación presente en el 0,1 % en un entorno de ADN genómico nativo en un solo pocillo de nanoplaca.

Dos opciones de detección por fluorescencia permiten el análisis múltiple de dos dianas de mutación en un pocillo. Durante la configuración del producto, se encuentra disponible la opción de FAM + HEX o Atto 550 + ROX para detectar el tipo mutante + nativo.

Para preparar el experimento de dPCR, añada una alícuota de la muestra de ADN genómico (aislado de las muestras nuevas, congeladas o fijadas) a la mezcla maestra del QIAcuity MasterMix y el dPCR LNA Mutation PCR Assay. Cada reacción se analiza en uno o varios pocillos de una QIAcuity Nanoplate.

Tras cargar y sellar la nanoplaca, seleccione el programa de ciclado recomendado en el instrumento QIAcuity. En el tipo de análisis de cuantificación absoluta del QIAcuity Software Suite, se muestra el resultado de las copias por microlitro. La abundancia fraccional calculada del blanco mutante y las cifras de datos correspondientes se encuentran disponibles en el tipo de análisis de mutación.

Los dPCR LNA Mutation PCR Assays están especialmente pensados para identificar de forma rápida y exacta las mutaciones de secuencias específicas individuales presentes en el ADN de muestras nuevas, congeladas o fijadas.