QuantiNova Pathogen +IC Kit

• Controles internos preoptimizados sin coste adicional
• (RT)-PCR cuádruple para la detección de dianas de microorganismos patógenos y control interno
• Procedimiento exclusivo de hot start en dos fases para una configuración a temperatura ambiente óptima
• RT estable incluida en la mezcla maestra, lo que proporciona un protocolo fácil de usar
• Control visual del pipeteo para disminuir los errores

El QuantiNova Pathogen +IC Kit se ha diseñado para la detección sensible y rápida de real-time PCR de ácidos nucleicos de microorganismos patógenos mediante sondas específicas de secuencia. El kit contiene reactivos para la detección en tiempo real cuádruple de dianas de microorganismos patógenos definidas por el usuario (p. ej., virus, bacterias, hongos, etc.) y el ARN o ADN del QuantiNova Internal Control (IC). Tanto los IC como el ensayo se incluyen para su uso como controles de amplificación o extracción, lo que permite una interpretación correcta de los resultados de detección negativos. Asimismo, el kit ultrarrápido y listo para usar ofrece una configuración de la reacción a temperatura ambiente óptima para un flujo de trabajo racionalizado y automatizado, así como un control visual del pipeteo para aumentar los estándares de manipulación y seguridad. Por motivos de conveniencia, la mezcla maestra puede almacenarse a una temperatura de 2-8 °C.

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El QuantiNova Pathogen +IC Kit permite la detección simultánea de las dianas de ADN o ARN víricas y el QuantiNova Internal Control (IC) en un amplio intervalo lineal sin la pérdida de sensibilidad al efectuar la prueba múltiple. El protocolo se ha desarrollado para llevar a cabo experimentos termociclados ultrarrápidos con gran fiabilidad en la mayoría de los termocicladores. La amplificación combinada de las dianas de microorganismos patógenos y el ADN o ARN de IC aumenta la seguridad durante el proceso al garantizar la interpretación correcta de los resultados negativos. El IC incluido puede utilizarse para controlar el proceso de amplificación o purificación del ácido nucleico, mientras que el control visual del pipeteo permite una comprobación visual tras el pipeteo manual o robotizado (consulte la figura  Preparación exacta de reacciones indicada por el control de pipeteo integrado). El procedimiento exclusivo de hot start de dos fases permite realizar la preparación de la reacción de manera automatizada o manual a temperatura ambiente sin poner en riesgo el rendimiento (consulte la figura  Principio del nuevo mecanismo de hot start de dos fases de QuantiNova.). El QuantiNova Pathogen +IC Kit es robusto incluso cuando hay inhibidores y permite el uso de sondas y cebadores degenerados. El kit ofrece una qPCR múltiple ultrarrápida y controlada durante el proceso, lo que aumenta la fiabilidad y la eficacia del flujo de trabajo.

Para permitir una mayor seguridad durante el proceso a través de la interpretación correcta de los resultados negativos, cada QuantiNova Pathogen +IC Kit contiene reactivos para la detección en tiempo real y múltiple de las dianas de microorganismos patógenos definidas por el usuario con controles internos. La amplificación de genes diana y de control en la misma reacción aumenta la fiabilidad al disminuir los errores de manipulación. El IC suministrado puede utilizarse para comprobar el éxito de la amplificación (p. ej., la exclusión de inhibidores de PCR) o añadirse a la muestra antes de la purificación del ácido nucleico para controlar tanto la eficacia del proceso de purificación como la amplificación por PCR o RT-PCR. La real-time PCR y la RT-PCR de un paso pueden llevarse a cabo simultáneamente si se utiliza el mismo protocolo. El kit también utiliza un procedimiento de hot start de dos fases (consulte la figura  Principio del nuevo mecanismo de hot start de dos fases de QuantiNova.). Esto incluye una activación por calentamiento tanto para la transcriptasa inversa HotStaRT-Script a 50 °C y la polimerasa PCR a 95 °C. Con temperaturas bajas, HotStaRT-Script forma un complejo con una molécula que bloquea la RT, lo que provoca la inactivación. A 50 °C, el complejo se desacopla y se libera la enzima HotStaRT-Script activa. La QuantiNova DNA Polymerase se mantiene en un estado inactivo por acción del anticuerpo QuantiNova Antibody y un nuevo aditivo, QuantiNova Guard, que estabiliza el complejo. De esta manera, se mejora la rigurosidad del procedimiento de hot start y previene la extensión de cebadores y de dímeros de cebador hibridados de manera no específica. A los 2 minutos de haber alcanzado una temperatura de 95 °C, el QuantiNova Antibody y el QuantiNova Guard se desnaturalizan y se activa la QuantiNova DNA Polymerase, lo que permite la amplificación por PCR. Este exclusivo hot start de dos fases permite que la preparación de la reacción permanezca estable durante al menos 1 hora a temperatura ambiente, lo que evita la creación de artefactos y facilita la preparación automatizada de reacciones.
Asimismo, la mezcla maestra suministrada con el kit contiene un colorante azul inerte que no interfiere en la transcripción inversa ni en la real-time PCR, pero sí aumenta la visibilidad en el tubo o en el pocillo. El QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer contiene un colorante amarillo inerte. Cuando el molde de ácido nucleico, diluido con el QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer, se añade a la mezcla maestra, el color de la solución cambia de azul a verde, lo que proporciona una indicación visual de una preparación de reacción y pipeteo correctos (consulte la figura  Preparación exacta de reacciones indicada por el control de pipeteo integrado). La mezcla maestra incluye una combinación equilibrada de iones de K⁺ y NH₄⁺, así como el exclusivo Factor MP sintético. La combinación de ambos favorece la hibridación estable y eficaz de cebadores y sondas al molde de ácido nucleico, lo que da como resultado una alta eficacia de la PCR incluso en reacciones múltiples (consulte la figura  El exclusivo tampón de PCR múltiple favorece una hibridación estable y eficaz). El tampón de PCR especialmente desarrollado contiene Q-Bond, que reduce de manera significativa los tiempos de desnaturalización, hibridación y extensión (consulte la figura  Mecanismo de termociclado rápido durante la hibridación). El QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer, suministrado con el kit, estabiliza los patrones de ADN y ARN durante la preparación de la reacción y dilución y previene la pérdida de ácidos nucleicos en las superficies de plástico, como tubos o puntas de pipetas. La mezcla maestra puede almacenarse a una temperatura de 2–8 °C durante 12 meses y la reacción permanece estable a temperatura ambiente durante al menos 1 hora, lo que resulta conveniente para los procedimientos automatizados.