miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assays

• Cebador de PCR directo y sonda de hidrólisis mejorados con LNA y específicos de miARN
• Detecte verdaderas señales en un rango de detección muy bajo, hasta 1 copia de miARN
• Flujo de trabajo rápido y sencillo de dos pasos que dura 2 horas
• Gran nivel de robustez y reproducibilidad para obtener resultados fiables

Los miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assays son juegos de cebador y sonda de PCR de miARN que permiten una cuantificación de miARN sumamente sensible y específica con el miRCURY LNA miRNA Probe PCR System. El sistema, sólido y sensible, permite la detección precisa de miARN a partir de muestras con contenido bajo en ARN, incluido el suero, el plasma y la orina. Tanto el cebador de amplificación de PCR directo como la sonda etiquetada de supresor FAM y oscuro son específicos de miARN y están optimizados con tecnología de LNA, que impulsa el rendimiento del ensayo. Los ensayos para todos los miARN importantes están validados en mesa de laboratorio. Además de los ensayos prediseñados, que cubren todos los miARN en miRBase, los miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays se pueden crear con facilidad para cualquier miARN de interés que utilice el mismo algoritmo de diseño.

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Detección altamente sensible de señales verdaderas

La sensibilidad excepcional de los miRCURY LNA miRNA Probe Assays se consigue combinando la transcripción inversa universal con cebadores y sondas mejorados con LNA, normalizados con T_m y específicos de miARN. Esta combinación permite realizar una cuantificación precisa y fiable de miARN concretos a partir de tan solo 1 pg de ARN total o hasta 1 molécula sin preamplificación (consulte  Cuantificación precisa incluso con poco material de inicio y eficiencia excepcional en un amplio intervalo dinámico). La sensibilidad y el rápido flujo de trabajo hacen que el sistema sea particularmente adecuado para las muestras de suero o plasma y las enzimas de QuantiNova garantizan unos resultados altamente reproducibles entre las réplicas técnicas y biológicas en el primer intento, lo que ahorra material de muestras y tiempo.

En comparación con otros sistemas de PCR basados en sonda de miARN que dependen solo de la sonda para generar especificidad, el cebador y la sonda mejorados con LNA de los miRCURY LNA miRNA Probe Assays son específicos de miARN y lo suficientemente cortos como para evitar el solapamiento al unirse a la diana (consulte  Resumen de miRCURY LNA miRNA Probe PCR System). Como resultado, los miRCURY LNA miRNA Probe Assays superan a soluciones alternativas en cuanto a eficiencia (consulte  Mejora de la eficiencia en comparación con soluciones alternativas), linealidad y sensibilidad sin preamplificación (consulte  Mejora de la linealidad y la alta sensibilidad sin preamplificación). En combinación con una relación señal-ruido excelente (consulte  Detección precisa incluso con un fondo de ARN elevado), esta función única permite la discriminación de miARN estrechamente relacionada con diferencias de secuencia de tan solo un nucleótido (consulte  Potencia discriminatoria de hasta una diferencia de tan solo un nucleótido).

Validado y optimizado

Los diseños de ensayos (cebador y sonda) se basan en un algoritmo de diseño creado por expertos en LNA y en ensayos. Este exhaustivo algoritmo evalúa y optimiza 60 parámetros que están validados por ordenador frente a criterios de rendimiento muy rigurosos para garantizar un diseño que ofrece la mayor sensibilidad. Los resultados son ensayos que pueden detectar hasta 1 copia de miARN. Los ensayos para todos los miARN importantes también están totalmente validados en mesa de laboratorio.

Cobertura

Más de 30.000 ensayos disponibles que cubren todo miRBase 22. Más de 1000 ensayos están totalmente validados en mesa de laboratorio para probar la sensibilidad, la especificidad, la eficiencia y el fondo. Los ensayos restantes están validados por ordenador mediante un algoritmo de diseño exhaustivo con rigurosos criterios de rendimiento del ensayo, lo cual garantiza que sean de alta calidad, específicos para cada especie y mejorados con LNA, con una sensibilidad y especificidad óptimas en cada microrganismo. Si trabaja con miARN nuevos, como los procedentes de un experimento de NGS, diseñe su propio ensayo con los miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays.

Rápido y sencillo

Este protocolo fácil de seguir de 2 horas de duración ahorra tiempo y trabajo. Al utilizar una transcripción universal y protocolos de RT-PCR optimizados, el procedimiento se ha simplificado en gran medida en comparación con otras soluciones. Además, el ADNc generado en el paso de RT se puede utilizar en todo el miRCURY LNA miRNA Probe PCR System, lo que le permite hacer una transición fluida de los paneles a los ensayos en función de sus necesidades de investigación, además de ahorrar material de muestras y tiempo. El número de pasos de pipeteado se reduce al mínimo, lo que disminuye también la variación técnica. La robustez de los ensayos permite una preparación a temperatura ambiente y el retraso de ejecuciones para una mayor sensibilidad y el uso en automatización (consulte «Estabilidad de la reacción y robustez de la preparación»). Este flujo de trabajo simplificado, combinado con la elaboración de ensayos que cumplen la normativa ISO (consulte  Alta uniformidad entre lotes), permite alcanzar una reproducibilidad de un día para otro y de un centro a otro sumamente alta.

El miRCURY LNA miRNA Probe PCR System permite una cuantificación y una creación de perfiles de miARN sensibles y específicas mediante real-time PCR. La detección se basa en una sonda de hidrólisis etiquetada de supresor FAM y oscuro. El sistema cubre todos los pasos relacionados con la conversión del miARN a ADNc y la detección posterior de qPCR de miARN. Los miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assays se han validado utilizando la QuantiNova Probe Master Mix; si se utilizan otros reactivos para la qPCR, esto afectará a los resultados.

RNA Spike-In Kit para RT

El RNA Spike-In Kit permite realizar un control de calidad de los pasos de aislamiento de ARN, síntesis de ADNc y amplificación de PCR de los experimentos de miRCURY LNA miRNA Probe PCR para que pueda identificar cualquier muestra de calidad deficiente en una fase temprana del proceso y ahorrar tiempo y reactivos. El kit incluye UniSp2, UniSp4 y UniSp5 RNA Spike-in Template Mix y el cel-miR-39-3p RNA Spike-in Template.

miRCURY LNA RT Kit

Un kit de transcripción inversa universal para dos sistemas de detección. El miRCURY LNA RT Kit se utiliza tanto para el miRCURY LNA miRNA PCR System, que usa el SYBR Green para la detección, como el miRCURY LNA miRNA Probe PCR System basado en sonda. El kit incluye dos tampones de reacción específicos del sistema y todos los reactivos necesarios para realizar una poliadenilación y una transcripción inversa rápidas y cómodas de miARN en un único paso de reacción.

miRCURY LNA Probe PCR Kit

Este kit, que está optimizado y especializado para el miRCURY LNA miRNA Probe PCR System, contiene la QuantiNova Probe Master Mix de alto rendimiento y el miRCURY Probe Universal Reverse Primer. En combinación con un miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assay o un miRCURY LNA miRNA Probe PCR Panel, la química permite la detección de miARN mediante real-time PCR cuantitativa.

miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assays

Estos ensayos de cebadores y sondas utilizan sondas de hidrólisis específicas de miARN y cebadores directos específicos de miARN diseñados para detectar los miARN maduros que utilizan la información de secuencias más actualizada de miRBase 22. El miRCURY Probe Universal Reverse Primer se incluye en el miRCURY Probe PCR Kit.

miRCURY LNA miRNA Probe PCR Panels

Placas de panel de PCR listas para usar, prediseñadas y de un único uso para perfilar con rapidez miARN maduros centrándose en el miARNoma, vías específicas, determinados tipos de muestras como suero/plasma o en un panel personalizado diseñado por el usuario.

Centro de análisis de datos GeneGlobe

Esta herramienta de análisis complementaria basada en la web le guía paso a paso mediante un asistente sencillo a través de la normalización y el análisis de sus datos y genera cifras listas para la publicación.

Ensayos de agregado

Ensayos de control

El primer paso, la reacción de transcripción inversa es una reacción fácil de realizar de un único tubo. El ARN total, incluido el miARN, se utiliza como material de inicio y el ADNc resultante se emplea en la amplificación de real-time PCR con cebadores y sonda de hidrólisis mejorados con LNA para detectar los miARN maduros. Esto permite una cuantificación y perfilación de miARN sencillas y accesibles para cualquier laboratorio con un termociclador de real-time PCR.

Los miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assays se utilizan como parte del miRCURY LNA miRNA Probe PCR System para:

• Detección, creación de perfiles y cuantificación de la expresión de miARN
• Desarrollo, cribado e identificación de biomarcadores de miARN
• Regulación de miARN y análisis de trayectoria
• Detección de miARN en tipos de muestras complejas y muestras con bajos niveles de expresión de miARN (por ejemplo, exosomas, suero, plasma, orina o secciones de FFPE)
• Detección de snoRNA
• Validación de la secuenciación de miARN