MinElute Gel Extraction Kit

Para la extracción en gel de fragmentos de ADN de hasta 5 µg (entre 70 bp y 4 kb) en volúmenes de elución bajos.

✓ Procesamiento automático sin interrupción de pedidos en línea

✓ Servicio técnico y para productos experto y profesional

✓ Realización y repetición de pedidos rápidas y fiables

MinElute Gel Extraction Kit (50)

Cat. No. / ID: 28604

50 MinElute Spin Columns, tampones, Collection Tubes (2 ml)

Preparations

250

1000

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El MinElute Gel Extraction Kit está concebido para su uso en aplicaciones de biología molecular. Este producto no está concebido para el diagnóstico, la prevención ni el tratamiento de enfermedades.

✓ Procesamiento automático sin interrupción de pedidos en línea

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Características

Volúmenes de elución muy bajos
Procedimiento rápido y manejo sencillo
Recuperaciones altas y reproducibles
Colorante de carga de gel para el análisis práctico de muestras

Detalles del producto

El MinElute Gel Extraction Kit incluye columnas de centrifugación, tampones y tubos de recogida para la purificación basada en membrana de gel de sílice de fragmentos de ADN de 70 bp–4 kb a partir de cortes de gel de hasta 400 mg. Las columnas de centrifugación se han diseñado para permitir la elución en volúmenes muy bajos (tan solo 10 µl), lo que genera altos rendimientos de ADN altamente concentrado. El indicador de pH integrado permite la fácil determinación del pH óptimo para la unión del ADN en la columna de centrifugación. Los fragmentos de ADN purificados con el sistema MinElute están listos para su uso directo en todas las aplicaciones, incluyendo la secuenciación, el análisis de micromatrices, la ligación y transformación, la digestión de restricción, el marcado, la microinyección, la PCR y la transcripción in vitro. El MinElute Gel Extraction Kit se puede automatizar en el instrumento QIAcube Connect.

Para obtener resultados óptimos, se recomienda utilizar este producto junto con QIAvac 24 Plus.

Rendimiento

El MinElute Gel Extraction Kit elimina nucleótidos, enzimas, sales, agarosa, bromuro de etidio y otras impurezas de las muestras de ADN, lo que proporciona ADN altamente concentrado adecuado para una variedad de aplicaciones posteriores (consulte la figura « Concentraciones más altas de ADN»).

El MinElute Gel Extraction Kit incluye columnas de centrifugación para la extracción en gel. Con el uso de una microcentrifugadora o un colector de vacío, el ADN de alta concentración de 70 bp–4 kb se purifica con rapidez. (Los fragmentos de ADN de 4 kb–10 kb se deben purificar con el QIAquick Gel Extraction Kit y los fragmentos de ADN menores que 70 bp o mayores que 10 kb se deben extraer con el QIAEX II Gel Extraction System.)

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Concentraciones más altas de ADN.

Principio

Los kits MinElute contienen un ensamblaje de membrana de síllice para la unión de ADN en tampón de alta salinidad y elución con tampón de baja salinidad o agua. La tecnología de membrana de sílice elimina los problemas e inconvenientes relacionados con las resinas sueltas y los residuos pastosos. Los tampones de unión especializados están optimizados para aplicaciones específicas y promover la adsorción selectiva de moléculas de ADN dentro de rangos de tamaño específicos.

Colorante de carga de gel

Para que el procesamiento y el análisis de las muestras sean más rápidos y prácticos, se proporciona el colorante de carga de gel. El GelPilot Loading Dye contiene tres colorantes de seguimiento (xileno cianol, azul de bromofenol y naranja G) para facilitar la optimización del tiempo de la serie del gel de agarosa y evitar que los fragmentos más pequeños de ADN migren demasiado lejos (consulte la figura « GelPilot Loading Dye »).

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GelPilot Loading Dye.

Procedimiento

El sistema MinElute utiliza un sencillo procedimiento de unión, lavado y elución (consulte el diagrama de flujo « Procedimiento de MinElute»). Los cortes de gel se disuelven en un tampón que contiene un indicador de pH y esto permite determinar fácilmente el pH óptimo para la unión del ADN (consulte la figura « Colorante indicador de pH»), y la mezcla se aplica a la MinElute Spin Column. Los ácidos nucleicos se adsorben a la membrana del gel de sílice en las condiciones de alta salinidad generadas por el tampón. Las impurezas se lavan y el ADN puro se eluye con un volumen pequeño de tampón suministrado de baja salinidad o agua, listo para usarse en aplicaciones posteriores.

Manejo

Las MinElute Spin Columns se han diseñado con dos prácticas opciones de manejo. Las columnas de centrifugación se adaptan a una microcentrifugadora de mesa convencional o a un colector de vacío con conectores Luer, como el QIAvac 24 Plus con QIAvac Luer Adapters. El MinElute Gel Extraction Kit, además de otros kits de columna de centrifugación de QIAGEN, se puede automatizar por completo en el instrumento QIAcube Connect para así incrementar la productividad y la normalización de los resultados (consulte las figuras «Opciones de manejo de la columna de centrifugación A, B, C, D y QIAcube Connect»).

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Procedimiento de MinElute.

Colorante indicador de pH

Opciones de manejo de la columna de centrifugación — A.

Opciones de manejo de la columna de centrifugación — B.

Opciones de manejo de la columna de centrifugación — C.

Opciones de manejo de la columna de centrifugación — D.

QIAcube Connect.

Aplicaciones

Los fragmentos de ADN purificados con el sistema MinElute o QIAquick están listos para su uso directo en todas las aplicaciones, incluyendo las indicadas a continuación:

Secuenciación, incluida la secuenciación de nueva generación
Análisis de micromatrices
Ligación y transformación
Digestión de restricción
Marcado

Datos y cifras de respaldo

Opciones de manejo de la columna de centrifugación — C.

Colector con conectores Luer

Specifications

Features	Specifications
Binding capacity	5 µg
Elution volume	10 µl
Fragment size	70 bp–4 kb
Sample type: applications	ADN: Reacciones de PCR
Technology	Extracción en gel
Recovery: oligonucleotides dsDNA	Recuperación: fragmentos de ADNbc
Format	Tubo
Processing	Manual

Recursos

Publications

MicroRNA-137 targets microphthalmia-associated transcription factor in melanoma cell lines.

Bemis LT; Chen R; Amato CM; Classen EH; Robinson SE; Coffey DG; Erickson PF; Shellman YG; Robinson WA;

Cancer Res; 2008; 68 (5):1362-8 2008 Mar 1 PMID:18316599

Molecular and phylogenetic analyses reveal mammalian-like clockwork in the honey bee (Apis mellifera) and shed new light on the molecular evolution of the circadian clock.

Rubin EB; Shemesh Y; Cohen M; Elgavish S; Robertson HM; Bloch G;

Genome Res; 2006; 16 (11):1352-65 2006 Oct 25 PMID:17065608

An accurate fluorescent assay for quantifying the extent of RNA editing.

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Adaptive evolution of fertilization proteins within a genus: variation in ZP2 and ZP3 in deer mice (Peromyscus).

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Crampton N; Bonass WA; Kirkham J; Rivetti C; Thomson NH;

Nucleic Acids Res; 2006; 34 (19):5416-25 2006 Sep 29 PMID:17012275

FAQ

The MinElute spin columns included in the following kits should be stored at 2–8°C upon arrival: AllPrep DNA/RNA Micro, EpiTect Fast DNA Bisulfite, EpiTect Fast FFPE Bisulfite, EpiTect Fast LyseAll Bisulfite, EpiTect Plus DNA Bisulfite, EpiTect Plus FFPE Bisulfite, EpiTect Plus LyseAll Bisulfite, exoRNeasy Serum/plasma Maxi, exoRNeasy Serum/Plasma Midi, GeneRead DNA FFPE, GeneRead rRNA Depletion, GeneRead Size Selection, MinElute Gel Extraction, MinElute PCR Purification, MinElute Reaction Cleanup, miRNeasy FFPE, miRNeasy Micro, miRNeasy Serum/Plasma, QIAamp DNA FFPE, QIAamp DNA Investigator, QIAamp DNA Micro, QIAamp MinElute Media, QIAamp MinElute Virus Spin, QIAamp MinElute Virus Vacuum, RNeasy FFPE, RNeasy Micro, RNeasy Plus Micro.

Short-term storage (up to 4 weeks) at room temperature (15–25°C) does not affect the performance. However, for optimal performance and quality, storage temperature should not exceed 25°C.

FAQ ID - 3560

Cut out the slice of agarose containing the DNA fragment of interest, and store it at 4^oC in an Eppendorf tube sealed with Parafilm.

FAQ ID -313

Yes, and therefore they are interchangeable.

FAQ ID -581

Yes. The QIAquick Gel Extraction Kit for extraction of DNA from gels can also be used for RNA gel extraction. Please see a user-developed procedure below, which was kindly provided by J. Knobloch, Heinrich Heine University, Düsseldorf, Germany. Note that this protocol has not been thoroughly tested and optimized by QIAGEN. QIAquick Gel Extraction Kits are not guaranteed to be RNase-free.

Excise the RNA fragment from the formaldehyde agarose gel with a clean, sharp scalpel.
Weigh the gel slice, and record the weight. Soak the gel slice in TE buffer for 25 min at room temperature with gentle shaking.
Remove the gel slice from the TE buffer, and place it in a colorless tube. Add 6 volumes of Buffer QG to 1 volume of gel, based on the gel weight (100 mg ~ 100 µl).
Incubate at 58°C for 25 min. To help dissolve the gel, mix by vortexing the tube every 2–3 min during the incubation.
Continue the QIAquick Gel Extraction Kit Protocol (using a microcentrifuge) in the QIAquick Spin Handbook, beginning with step 4.

Please click here for Figure 1.

Figure 1:

A. Total RNA was isolated from the parasitic blood fluke Schistosoma mansoni using the RNeasy Mini Kit and run on a formaldehyde agarose (1.2%) gel. (Note: The 28S rRNA in S. mansoni contains a break site so that the rRNA splits into two parts, which run on a gel at the same size as the 18S rRNA.) The rRNA bands were excised and treated as described above (left lane) or using 10 volumes of Buffer QG in step 3 (right lane).

B. The extracted RNA was then analyzed on a new formaldehyde agarose gel. (Data kindly provided by J. Knobloch, Department of Genetic Parasitology, Heinrich Heine University, Düsseldorf, Germany).

FAQ ID -133

DNA fragments purified with the QIAGEN DNA Cleanup Systems, i.e., the QIAquick PCR Purification Kit, the MinElute Reaction Cleanup Kit, the QIAEX II Gel Extraction Kit etc. may float out of the loading wells of agarose gels due to residual ethanol carried over from the wash step with Buffer PE (despite the addtition of glycerol-containing loading buffer).

Use either of the following options to remove residual ethanol from the eluate:

re-purify the sample using a QIAquick-, or MinElute column, or QIAEX II resin
incubate the eluate at 56°C for 10 min to evaporate the ethanol
dry down the sample in a vacuum centrifuge, and resuspend the pellet in a small volume of sterile water

FAQ ID -205

As a rule of thumb, single-stranded DNA binds to silica with approximately half the affinity of a double-stranded DNA fragment of the same length under the buffer conditions used in the QIAquick and MinElute Kits. Even though no systematic experimental data exists, we expect that recovery of ssDNA fragments of approximately 200 nucleotides and below will not be very efficient after cleanup using the QIAquick PCR Purification Kit or MinElute PCR Purification Kit. By comparison, it should be possible to purify fragments longer than 140 nucleotides using the QIAquick Gel Extraction Kit.

Note that recovery of single strand DNA is influenced to some degree also by factors such as base composition and secondary structure. It has to be determined empirically by the researcher if cleanup of single-stranded DNA with QIAquick columns yields satisfactory results.

FAQ ID -759

The composition of Buffer EB is:

10 mM Tris-Cl, pH 8.5

Buffer EB is the elution buffer used in the QIAquick PCR, Gel Extraction, Nucleotide Removal Kits, and MinElute Kits for DNA cleanup, and the QIAprep Miniprep Kits for small-scale plasmid purification. The purified DNA can also be eluted in TE (10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA, pH 8.0), but the EDTA may inhibit subsequent enzymatic reactions.

FAQ ID -199

Occasionally, DNA fragments eluted from the silica matrix of QIAquick, MinElute or QIAEX II Kits will contain denatured single-stranded DNA (ssDNA), appearing as a smaller band on an analytical gel. Under certain conditions, chaotropic agents (present in all silica-based DNA purification methods) can denature DNA fragments. This is a rare event that may be influenced by sequence characteristics such as the presence of inverted repeats or A–T-rich stretches.

Because salt and buffering agents promote renaturation of DNA strands, the following tips are recommended:

use the eluted DNA to prepare your downstream enzymatic reaction, but omit the enzyme. Incubate the reaction mix at 95°C for 2 minutes to reanneal the ssDNA, and allow the tube to cool slowly to room temperature before adding the enzyme and proceeding
alternatively, the DNA can be eluted from the silica-gel membrane or resin in 10 mM Tris buffer containing 10 mM NaCl. However, the salt concentration of the eluate must then be taken into consideration in downstream applications.

FAQ ID -148

The QIAquick Spin Columns (100) (cat. no. 28115) in the QIAquick PCR Purification, Gel Extraction, Nucleotide Removal and PCR & Gel Cleanup kits are also sold separately from the kits.

The MinElute columns in the MinElute PCR Purification, Gel Extraction and Reaction Cleanup kits are not sold separately.

We always provide extra buffers in our kits so you can scale up reactions, add extra washes or allow for spillage.

FAQ ID -2460

The QIAEX II and QIAquick Gel Extraction Kit can be used to extract DNA from polyacrylamide gels.

The QIAEX II Handbook contains a protocol for Polyacrylamide Gel Extraction. A specialized User-Developed Protocol (QQ05) is available when using the QIAquick Gel Extraction Kit for this purpose.

Both protocols require the preparation of a diffusion buffer and a disposable plastic column or syringe barrel containing a Whatman GF/C filter or siliconized glass wool. To ensure optimal diffusion, cut the gel slices as small as possible, and use 2 volumes of diffusion buffer per 1 volume of gel. Increasing incubation time (protocol step 3) may result in higher yields.

FAQ ID -120