Terapia genética: creación de terapias seguras y eficaces
La terapia genética consiste en la transmisión de material genético a las células del cuerpo del paciente para tratar o potencialmente curar diversos trastornos genéticos.
La terapia genética más común se realiza mediante transferencia genética mediada víricamente con virus adenoasociado (Adeno-Associated Virus, AVV) o lentivirus. Los vectores AAV tienen un tamaño de empaquetamiento pequeño (−5 kb), pero son virus no integradores, lo que ofrece una expresión prolongada del transgén. No pueden propagarse sin virus auxiliares, lo que los hace seguros para uso clínico.
La dPCR también es importante en el control de la contaminación, que es un proceso esencial en entornos de fabricación destinados a minimizar y eliminar sustancias no deseadas, especialmente en la producción de productos biofarmacéuticos. La dPCR proporciona una mayor sensibilidad de detección para pequeñas concentraciones de material inicial, lo que permite obtener resultados más sólidos.
Flujo de trabajo de la terapia genética
Recursos para las aplicaciones de terapia genética
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Control de la contaminación
El control de la contaminación implica procedimientos y normas rigurosos para garantizar que los contaminantes, como el ADN residual de células huésped (ADNres o HCD), no comprometan la seguridad y eficacia del producto. El arrastre de HCD residual plantea problemas de seguridad graves en la fabricación de proteínas y vacunas terapéuticas. Los riesgos incluyen la oncogenicidad, la infectividad y la inmunogenicidad causada por el producto final. Por lo tanto, los niveles de HCD no deben superar los establecidos por las agencias reguladoras, como la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) y la Organización Mundial de la Salud (OMS).
Además, el ADN contaminado en sus reactivos de PCR podría ser una fuente significativa de ruido de fondo y falsos positivos. Ultra Clean Production mejora la especificidad y eficiencia de la PCR digital basada en sondas para proporcionar un análisis preciso, simple o quintuplexado. Se aplican procesos específicos para permitir Ultra Clean Production de la mezcla maestra, lo que minimiza el ruido de fondo de ADN contaminante y el sesgo de GC y le ofrece la certeza absoluta en sus reactivos de PCR. Esto la convierte en una opción ideal para aplicaciones microbianas sin contaminación, así como para aplicaciones de control de calidad, como las pruebas de ADN residual.
Detección de micoplasma
Los micoplasmas son contaminantes comunes en los productos biológicos derivados de líneas celulares en la industria biofarmacéutica. A menudo se introducen a partir de las líneas celulares de origen o durante la producción. Diversas directrices y documentos técnicos abordan los riesgos de contaminación por micoplasmas en el proceso de fabricación.
La PCR digital es un método eficaz para detectar estas contaminaciones por micoplasma en cultivos celulares y productos biológicos relacionados. Por ejemplo, el QIAcuity Mycoplasma Quant Kit es un kit RT-dPCR de alta sensibilidad que detecta ARNr y ADN y abarca 127 especies de micoplasmas. El kit incluye un control interno para evitar falsos negativos causados por inhibidores de la PCR o errores en la extracción del ARN y las reacciones de RT.
Por su parte, los QIAcuity Residual DNA Quantification Kits proporcionan resultados precisos de cuantificación de ADN residual (ADNres) de CHO, E. coli y HEK293 con o sin extracción, incluso en presencia de contaminantes de PCR u otros reactivos inhibidores. Se trata de ensayos de diana multicopia que determinan con precisión el ADN residual altamente fragmentado de la célula huésped.
