QuantiNova PCR Kits

Para PCR y PCR múlt. en tiempo real bas. en sondas ultrarrápidas y de gran sensib. y espec. y para ob. de result. inmejorables con qPCR bas. en SYBR Green.

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QuantiNova Probe PCR Kit (100)

Cat. No. / ID:  208252

Para 100 reacciones de 20 µl: 2x QuantiNova Probe PCR Master Mix 1 ml, QN ROX Reference Dye 250 µl, QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer 500 µl, agua 1,9 ml
Copy order details
Detection type
Probe
Multiplex Probe
SYBR Green
Reactions
100
500
2500
7500
QuantiNova PCR Kits están concebidos para su uso en aplicaciones de biología molecular. Estos productos no están concebidos para el diagnóstico, la prevención ni el tratamiento de enfermedades.
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Features

  • Preparación precisa de las reacciones con un indicador visual integrado
  • Detección exacta y robusta de dianas hasta solo una copia
  • Especificidad insuperable gracias a un novedoso mecanismo de hot start
  • Detección sensible de hasta 5 dianas en 1 tubo
  • Estabilidad en la reacción de hasta 100 horas a 30 °C para flujos de trabajo flexibles

Product Details

El QuantiNova SYBR Green PCR Kit (kit de qPCR con SYBR), que ofrece una mejora en la especificidad, sensibilidad, velocidad y seguridad de los procesos, establece nuevos estándares en la qPCR basada en SYBR Green. Un novedoso mecanismo de hot start aumenta considerablemente la especificidad de la real-time PCR, y la química optimizada produce resultados cuantitativos exactos de ADNc o ADNg en cualquier termociclador de real-time PCR con la detección de hasta una sola copia de la diana. Por último, un indicador visual integrado garantiza un pipeteo correcto.

Evite los efectos nocivos de realizar el cebado de manera incorrecta a temperaturas más bajas con el QuantiNova Probe PCR Kit (kit de qPCR con sonda). Gracias a un novedoso mecanismo de hot start mediado por anticuerpos, el kit aumenta la especificidad y la eficacia de la real-time PCR basada en sonda para proporcionar un análisis exacto de ADNc o ADNg simple o doble en diversos termocicladores de real-time PCR. La conveniencia adicional de la excelente estabilidad durante hasta 100 horas a temperatura ambiente, sin necesidad de utilizar un agente refrigerante, lo hace ideal para la manipulación de muestras de alto rendimiento y flujos de trabajo automatizados. Un sistema de seguimiento integrado para la identificación visual del pipeteo correcto le brinda total tranquilidad, mientras que la detección extremadamente sensible de incluso pequeñas cantidades de diana garantiza resultados de qPCR fiables en todo momento.

Los QuantiNova Multiplex PCR Kits (kits de qPCR múltiple) también permiten la cuantificación fiable y rápida de hasta 5 dianas de ADNc o ADNg en un solo tubo mediante la real-time PCR múltiple o RT-PCR de dos pasos. La tecnología Q-Bond y una mezcla maestra optimizada favorecen la real-time PCR múltiple en 1 hora. La combinación de un exclusivo hot start y del sistema de tampón de PCR en la mezcla maestra cuádruple lista para usar garantiza una qPCR de alta sensibilidad en cualquier termociclador en tiempo real sin necesidad de optimización, y también ofrece opciones de preparación de reacciones automatizada a temperatura ambiente. Un sistema de seguimiento integrado para la identificación visual del pipeteo correcto ayuda a evitar el error humano, y la combinación con el QuantiNova Reverse Transcription Kit para la síntesis de ADNc permite incluir QuantiNova Internal Control RNA para supervisar la transcripción inversa y la qPCR correctas.

Performance

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Indicador visual integrado para la preparación exacta de las reacciones

La mezcla maestra suministrada con los QuantiNova PCR Kits contiene un colorante azul inerte que no interfiere en la real-time PCR, pero sí aumenta la visibilidad en el tubo o en el pocillo. El QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer contiene un colorante amarillo inerte. Cuando el molde del ácido nucleico se diluye en el QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer y se añade a la mezcla maestra, el color de la solución cambia de azul a verde (consulte la figura “ Preparación exacta de las reacciones indicada por el control de pipeteo integrado”), lo que brinda una indicación visual de que cada reacción se configuró correctamente.

QuantiNova SYBR Green PCR Kit

La gran sensibilidad del QuantiNova SYBR Green PCR Kit da como resultado la detección exacta y robusta de hasta una sola copia de la diana (Consulte la figura “ Detección robusta y sensible de dianas de una sola copia”). Esta excelente sensibilidad se alcanza incluso en condiciones de termociclado ultrarrápido.

El QuantiNova SYBR Green PCR Kit puede utilizarse con una gran variedad de cantidades de molde. El rendimiento de este kit de real-time PCR con SYBR se ha comprobado para un rango dinámico de 8 órdenes de magnitud (de 100 ng a 10 fg de ADNc) e independientemente del instrumento utilizado, la cuantificación fue exacta y robusta (consulte la figura “ Cuantificación exacta en un amplio rango dinámico”).

La rigurosa especificidad y la excepcional sensibilidad de la química de QuantiNova produce resultados excelentes en el QIAGEN Rotor-Gene Q, pero puede usarse en cualquier termociclador de real-time PCR, independientemente del formato, la capacidad de termociclado rápido y la necesidad de un colorante de referencia pasivo. El ROX suministrado con el QuantiNova SYBR Green PCR Kit simplemente se añade a la mezcla maestra si es necesario. Los resultados de amplificación y cuantificación del Rotor-Gene Q, Agilent Technologies Mx3005P, Applied Biosystems 7900 HT Fast, ViiA 7, StepOnePlus y 7500 Fast, Roche LightCycler 480 y Bio-Rad CFX96 son invariablemente robustos y sensibles.
El QuantiNova SYBR Green PCR Kit ofrece resultados superiores en comparación con otros kits de PCR con SYBR Green. Independientemente de las condiciones de termociclado o del instrumento, la química de QuantiNova genera de manera demostrable valores de CT más bajos, mayor reproducibilidad y una mayor eficacia de las reacciones.

El QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer brinda tranquilidad durante la preparación de las reacciones, pero no es necesario para obtener resultados superiores con el QuantiNova SYBR Green PCR Kit. La química de QuantiNova está diseñada para ser flexible, por lo que puede incorporarse a cualquier flujo de trabajo establecido. Por lo tanto, el rendimiento es óptimo con la diana de amplificación de su interés y el instrumento y el tampón de dilución de su elección.

QuantiNova Probe PCR Kit

La mezcla para real-time PCR de este kit de real-time PCR con sonda puede almacenarse a una temperatura de 30 °C durante un máximo de 100 horas sin que se altere el rendimiento de las reacciones posteriores. La excelente estabilidad, incluso tras un almacenamiento prolongado a temperatura ambiente sin el uso de ningún agente refrigerante hace que el QuantiNova Probe PCR Kit sea ideal para la preparación de reacciones de alto rendimiento y la manipulación de pilas de placas (consulte la tabla “Efecto del almacenamiento sobre la estabilidad de las reacciones”).

 

Efecto del almacenamiento sobre la estabilidad de las reacciones
Valores de CT medios
  QuantiNova Probe PCR Kit Kit de PCR con sonda del proveedor L
Cantidad en ng 0 h 100 h 0 h 100 h
10 24,37 24,49 24,35 27,49
1 27,78 27,90 27,77 30,97
0,1 31,16 30,98 31,37 34,48
Control sin molde No detectado No detectado No detectado No detectado

Comparación de los valores CT antes y después de un almacenamiento a 30 °C durante 100 horas. Las real-time PCR, incluidos la mezcla maestra, el ADNc de molde, los cebadores y las sondas para TNF, se incubaron a 30 °C durante 100 horas y se procesaron en la real-time PCR con reacciones recién preparadas. Se analizaron las reacciones por triplicado de 3 cantidades de molde diferentes. A diferencia del kit de PCR con sonda del proveedor L, los valores de CT que proporcionó el QuantiNova Probe PCR Kit no variaron tras un almacenamiento prolongado de las muestras a 30 °C.

La gran sensibilidad del QuantiNova Probe PCR Kit da como resultado la detección exacta y robusta de hasta una sola copia de la diana (consulte la figura “ Detección sensible y robusta de la copia de una sola diana”). La mezcla maestra especial suministrada con estos kits permite la cuantificación exacta de 2 dianas con grandes diferencias en el nivel de abundancia en un solo tubo. Esto le permite ahorrar tiempo, dinero y reduce la cantidad de material de muestra necesario. Es más, los datos de PCR obtenidos son similares a los obtenidos con una PCR simple.
La exclusiva combinación de la tecnología de tampones patentada y debidamente comprobada de QIAGEN y QuantiNova DNA Polymerase, QuantiNova Antibody y QuantiNova Guard, garantiza una real-time PCR correcta en el primer intento, sin necesidad de realizar optimizaciones costosas que demandan mucho tiempo, incluso en el caso de los ensayos de real-time PCR difíciles (consulte la figura “ Resultados superiores con ensayos difíciles”).

El QuantiNova Probe PCR Kit puede utilizarse en cualquier termociclador en tiempo real. El ROX se suministra en un tubo separado y se puede añadir si se utiliza un termociclador que emplea ROX como colorante de referencia pasivo. El kit produce resultados muy coherentes en diferentes termocicladores en cuanto a sensibilidad, reproducibilidad y eficacia. La coherencia de los resultados se mantiene, independientemente de las cambiantes capacidades de termociclado rápido de los diferentes termocicladores que resultan en diferentes protocolos de termociclado.

QuantiNova Multiplex PCR Kits

La mezcla maestra especial suministrada con los QuantiNova Multiplex PCR Kits permite la preparación rápida de reacciones múltiples y produce resultados correctos en el primer intento, proporcionando datos de PCR múltiple que son similares a los datos de PCR simple. La mezcla maestra cuádruple muy concentrada admite la entrada de molde de hasta 800 ng, lo que garantiza una excelente sensibilidad, incluso en reacciones quíntuples. El kit puede distinguir claramente entre pequeñas diferencias en la cantidad de molde y proporcionar una cuantificación exacta de las dianas con grandes diferencias en el nivel de abundancia.

Un novedoso mecanismo de hot start mediado por anticuerpos garantiza una excelente especificidad y permite la preparación de las reacciones a temperatura ambiente, ideal para procedimientos automáticos. El tampón de PCR rápida especialmente desarrollado contiene el aditivo Q-Bond, que reduce de manera significativa los tiempos de hibridación y extensión, lo que permite realizar la qPCR múltiple en menos de una hora. El control visual del pipeteo ayuda a evitar el error humano y aumenta la seguridad del proceso; en particular, si se combina con el Internal Control RNA suministrado con el QuantiNova Reverse Transcription Kit para la RT-PCR cuantitativa de dos pasos.

El QuantiNova Multiplex PCR Kit aumenta la eficacia del flujo de trabajo al generar más información de una cantidad limitada de material de muestra al utilizar la qPCR múltiple ultrarrápida y controlada durante el proceso.

See figures

Principle

Los QuantiNova PCR Kits ofrecen análisis de ADNc o ADNg con excelente especificidad gracias a un novedoso mecanismo de hot start mediado por anticuerpos (consulte la figura “ Principio del nuevo mecanismo de hot start de QuantiNova”). A bajas temperaturas, la QuantiNova DNA Polymerase se mantiene en un estado inactivo por acción del anticuerpo QuantiNova Antibody y el nuevo aditivo, QuantiNova Guard, que estabiliza el complejo. De esta manera, se mejora la rigurosidad del hot start y previene la extensión de cebadores y de dímeros de cebador hibridados de manera no específica. A los 2 minutos de haber aumentado la temperatura a 95 °C, el QuantiNova Antibody y el QuantiNova Guard se desnaturalizan y se activa la QuantiNova DNA Polymerase, lo que permite la amplificación.

Además, la química de QuantiNova incluye características que optimizan el flujo de trabajo sin pérdida de la sensibilidad y la eficacia de la PCR. Los colorantes inertes de la mezcla maestra y del QuantiNova Yellow Dilution Buffer sirven como un indicador visual de que cada reacción se ha configurado correctamente. El color azul de la mezcla maestra aumenta la visibilidad del contenido del recipiente de reacción y cambia a verde al añadir el molde de ácidos nucleicos diluidos en el QuantiNova Yellow Dilution Buffer (consulte la figura “ Preparación exacta de las reacciones indicada por el control de pipeteo integrado”). La exclusiva formulación del tampón de PCR incluido en los QuantiNova SYBR PCR Kits aumenta la rigurosidad del mecanismo de hot start y acorta los pasos de termociclado de modo que su PCR se ejecute más rápido y se pueda aumentar el rendimiento.

Los QuantiNova Multiplex PCR Kits producen resultados muy sensibles y rápidos en un amplio rango dinámico en termocicladores estándar y rápidos sin optimización. El tampón de PCR rápida especialmente desarrollado contiene el aditivo Q-Bond, que reduce de manera significativa los tiempos de hibridación y extensión (consulte la figura “ Hibridación rápida de cebadores”).

La amplificación de genes diana y de referencia en la misma reacción, en lugar de en reacciones independientes, aumenta la fiabilidad de la cuantificación genética al reducir al mínimo los errores de manipulación. Además, el Internal Control RNA suministrado en el QuantiNova Reverse Transcription Kit para la RT-PCR cuantitativa de dos pasos puede incorporarse para supervisar la transcripción inversa y la qPCR correctas.

El QuantiNova Multiplex PCR Buffer incluye una combinación equilibrada de iones de K+ y NH4+, así como el exclusivo Factor MP sintético. La combinación de ambos permite la hibridación estable y eficaz de cebadores y sondas al molde de ácido nucleico, lo que produce una alta eficacia de la PCR (consulte la figura “ El exclusivo tampón de PCR múltiple favorece una hibridación estable y eficaz”).
La mezcla maestra del QuantiNova Multiplex PCR Kit puede almacenarse cómodamente a 2-8 °C durante un máximo de 12 meses; además, la reacción configurada se mantiene increíblemente estable a temperatura ambiente, lo que permite realizar procedimientos automatizados para aumentar la eficacia y la exactitud.

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Procedure

Los QuantiNova PCR Kits contienen mezclas maestras listas para usar que eliminan la necesidad de optimizar las condiciones de reacción y termociclado. Simplemente añada ADNg o ADNc de molde y cebadores (detección basada en SYBR Green) o ADNg o ADNc de molde, cebadores y sondas (detección basada en sondas) a la mezcla maestra y siga el protocolo del manual de uso para obtener resultados rápidos y fiables en cualquier termociclador en tiempo real. El colorante de referencia pasivo ROX se suministra en un tubo separado y las concentraciones del colorante pueden ajustarse según el tipo de termociclador que se use. Por tanto, los QuantiNova PCR Kits pueden utilizarse en casi cualquier termociclador en tiempo real, independientemente del formato o de las condiciones de termociclado. Gracias a las concentraciones optimizadas de ROX, se logra la detección incluso de números de copias bajos a través del análisis automático de los datos.

Los QuantiNova Multiplex PCR Kits contienen mezclas maestras cuádruples listas para usar que eliminan la necesidad de optimizar las condiciones de reacción y termociclado. Simplemente añada hasta 800 ng de ADN del molde y juegos de cebador-sonda a la mezcla maestra y siga el protocolo del manual de uso para obtener resultados rápidos y fiables en cualquier termociclador en tiempo real. Los kits incorporan el colorante de referencia pasivo ROX en un tubo separado, para ajustar la concentración correcta de ROX, si es necesario para el instrumento.

Para obtener resultados óptimos en la RT-PCR de dos pasos en tiempo real, recomendamos sintetizar ADNc utilizando el QuantiNova Reverse Transcription Kit, que realiza la síntesis rápida del ADNc en solo 20 minutos con la eliminación integrada de la contaminación del ADN genómico. Además, incluye QuantiNova Internal Control RNA, lo que permite una supervisión durante el proceso de la transcripción inversa y la qPRC correctas.

Para optimizar el flujo de trabajo, recomendamos combinar los QuantiNova Kits con nuestros ensayos o paneles de real-time PCR QuantiNova prediseñados. Estos ofrecen la cuantificación precisa del ARNm o transcritos de ARN extenso sin codificación, independientemente del nivel de abundancia. Elija entre una gran variedad de conjuntos de cebadores prediseñados de humano, ratón y rata, o personalice sus propios ensayos y paneles utilizando nuestras herramientas de diseño avanzado. 

Nuestros QuantiNova LNA PCR y QuantiNova LNA Probe PCR Assays utilizan tecnología LNA para alcanzar mayor sensibilidad, lo que permite obtener perfiles de expresión génica sin sesgo y datos científicos más rápidos.

Applications

El QuantiNova SYBR Green puede utilizarse para el análisis de expresión génica basado en SYBR Green de dianas de ADNc y para el análisis cuantitativo de ADNg en cualquier termociclador en tiempo real. Esto incluye instrumentos de Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, LIFE Technologies, Roche y Agilent, y también el Rotor-Gene Q.

Los QuantiNova Probe PCR Kits pueden utilizarse para el análisis de expresión génica basado en sondas de dianas de ADNc y para el análisis cuantitativo de ADNg en cualquier termociclador en tiempo real. Esto incluye instrumentos de Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche y Agilent.

Los QuantiNova Multiplex PCR Kits pueden utilizarse para el análisis múltiple de expresión génica de dianas de ADNc o de ADNg en cualquier termociclador en tiempo real. Para aprovechar al máximo la capacidad de los beneficios de la multiplexación, recomendamos instrumentos que ofrecen capacidad quíntuple, como el Rotor-Gene Q.

Supporting data and figures

Resources

Selection Guides (1)
Scientific Posters (1)
Poster for download
Quick-Start Protocols (3)
For highly sensitive and specific real-time qPCR and two-step RT-PCR using SYBR Green
Kit Handbooks (4)
QuantiNova LNA Probe PCR Handbook
For highly sensitive, ultrafast, quantitative real-time PCR and two-step RT-PCR using SYBR Green
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

How do I setup and validate a multiplex PCR assay with QIAGEN PCR kits?

Ensure PCR amplicons are as short as possible, ideally 60–150 bp. Always use the same algorithm or software to design the primers and probes. For optimal results, only combine assays that have been designed using the same parameters.

 

Check the functionality of each set of primers and probes in individual assays before combining the different sets in the multiplex assay. Choose compatible reporters and quenchers based on a specific instrument. See How do I select appropriate reporter and quencher combinations for multiplex PCR.

 

FAQ ID -9093
Can I use uracil-N-glycosylase (UNG) with the QuantiFast and Rotor-Gene PCR kits?

No. UNG treatment does not provide any advantage for the QuantiFast and Rotor-Gene PCR kits because the mastermixes do not contain dUTP. Use the QuantiTect kits if you intend to use the UNG treatment.

FAQ ID -9092
Why do I see multiple high-intensity peaks in my qPCR dissociation curve at temperatures less than 70ºC?

If the extra peaks seem irregular or noisy, do not occur in all samples, and occur at temperatures less than 70 ºC, then these peaks may not represent real PCR products and instead may represent artifacts caused by instrument settings.

 

Usually extra peaks caused by secondary products are smooth and regular, occur reproducibly in most samples, and occur at temperatures greater than 70 ºC. Characterization of the product by agarose gel electrophoresis is the best way to distinguish between these cases. If only one band appears by agarose gel then the extra peaks in the dissociation curve are instrument artifacts and not real products. If this is the case, refer to the thermal cycler user manual, and confirm that all instrument settings (smooth factor, etc.) are set to their optimal values.

 

FAQ ID -90990
How do I quantify gene expression levels if the amplification efficiencies are different between the genes of interest and endogenous reference gene?

The REST 2009 (Relative Expression Software Tool) software applies mathematic models that compensate for the different PCR efficiencies of the gene of interest and reference genes. In addition, the software can use multiple reference gene normalization to improve the reliability of result, as well as provides statistical information suitable for robust comparison of expression in groups of treated and untreated. QIAGEN offers the REST 2009 software free of charge.

FAQ ID -9095
What do I do if no fluorescent signal is detected in a real-time PCR assay?

Check the template quality and integrity by amplifying an endogenous control gene. Check the amplicon by QIAxcel Advanced system or agarose gel electrophoresis to show that amplification was successful.

 

Determine whether the gene of interest is expressed in your sample. See How can I find out if my gene of interest is express in a specific tissue type or cell line.  Ensure the assay setup and cycling conditions are correct, and that the data collection channel matches the emission wavelength of the fluorescent dye used. Use a control sample in which the gene of interest is definitely expressed.

 

If the issue persists, please send the original run file to QIAGEN Technical Services.

FAQ ID -9091
How do I select appropriate reporter and quencher combinations for multiplex PCR?

For duplex analysis, using non-fluorescent quenchers (e.g., Black Hole Quencher®) is preferred over fluorescent quenchers (e.g., TAMRA fluorescent dye). For triplex and 4-plex analysis, QIAGEN strongly recommends using non-fluorescent quenchers. Generally, use the green channel, the yellow channel, and the orange and crimson channels to detect the least abundant target, the second least abundant target, and the two most abundant targets, respectively. For instrument-specific recommendations, please see the handbooks for the QuantiTect Multiplex PCR kit, QuantiFast Multiplex kit or Rotor-Gene Multiplex kit.

 

FAQ ID -9094
Can I skip the gDNA wipeout buffer treatment step for the QuantiTect Reverse Transcription Kit?

The gDNA wipeout buffer incubation step can be skipped when the total RNA is free from genomic DNA. However, the gDNA wipeout buffer is still required to be added because the reverse transcription step is optimized in the presence of components in the gDNA wipeout buffer.

FAQ ID -9098
How should I handle and store absolute quantitation standards for real-time experiments?
Store the standards at a high concentration in aliquots at -20oC to -70oC. If using low concentrations, stabilize standards with carrier nucleic acid. It is always best to use freshly diluted standards for each experiment. If possible, use siliconized tubes for standard (and target) dilutions. This will prevent any unspecific binding of nucleic acids to the plastic.
FAQ ID -9099
How do I ensure reliable results for High Resolution Melting (HRM) assays?

Reliable HRM analysis results depend on template quality, highly specific HRM PCR kit with a saturation dye, a real-time instrument with HRM capability, and powerful software package. Factors critical for successful HRM analysis are:

 

  • Use the same genomic DNA purification procedure for all samples being analyzed by HRM. This avoids variation due to differing composition of elution buffers.
  • DNA template concentrations should be normalized using the same dilution buffer. Ensure the CT values are below 30 and differ no more than 3 CT values across individual samples.
  • Design assays with amplicon length 70–350 bp. For SNP analysis, use amplicon length 70–150 bp.
  • Always start with 0.7 µM primer concentration

 

For more details, please refer to the HRM Technology – FAQs and the Critical Success Factor for HRM performance.

FAQ ID -9097
How do I avoid collecting a fluorescence reading from primer-dimer with the QuantiTect SYBR Green PCR Kit?

Depending on primer design and copy number of target, primer-dimer may occur and its signal might be detected. Typical strategies against this are to optimize PCR conditions and/or redesign the assay.

 

Alternatively, an additional data-acquisition step can be added to the 3-step cycling protocol. First, determine the melting temperatures (Tm) for both the amplicon and the primer-dimer. Then, add a 15 second data-acquisition step with a temperature that is higher than the primer-dimer Tm, but approximately 3ºC lower than the specific amplicon Tm.

FAQ ID -9096