Certal Residual DNA Detection Kits
Para la deteccion sensible basada en sondas de ADN residual de celulas huesped de ovario de hamster chino (CHO), incluido un control interno
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Cat. No. / ID: 211822
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Al trabajar con biofármacos, es fundamental evaluar el material terapéutico final para garantizar que no contenga sustancias contaminantes, como ADN residual de la célula huésped. Los Certal Residual DNA Detection Kits están diseñados para la cuantificación por real-time PCR sensible y rápida de ADN genómico residual de células huésped mediante sondas de hidrólisis de doble marcador (también denominadas TaqMan®). El Certal CHO Detection Kit contiene reactivos para la detección de ADN residual de células huésped de ovario de hámster chino (CHO) por real-time PCR doble más el Certal Internal Control. El kit también incluye el Certal Residual DNA Positive Control, que verifica la funcionalidad del ensayo PCR en ausencia de una señal de ADN de células huésped de ovario de hámster chino (CHO), y 2 formatos de colorante de referencia pasivo ROX en diferentes concentraciones, lo que permite su uso en casi cualquier instrumento en tiempo real.
Los Certal Residual DNA Detection Kits permiten la detección sensible y fiable y la cuantificación de ADN genómico (ADNg) residual, lo que es fundamental para la producción de biofármacos seguros y fiables (consulte la figura “ Detección extremadamente sensible y fiable”). El Certal CHO Detection Kit detecta ADNg residual de células de ovario de hámster chino (CHO) con un límite de detección bajo y un rango lineal alto, lo que garantiza la detección fiable de incluso bajos niveles de ADNg (consulte la figura “ Detección de límite bajo”). Los Certal Residual DNA Detection Kits son compatibles con una gran variedad de termocicladores, para ofrecer datos sensibles y fiables (consulte las figuras “ Detección sensible y fiable en una amplia gama de termocicladores” y “ Detección sensible y fiable del ADN genómico de CHO en el Rotor-Gene Q”).
Para ofrecer un alto nivel de seguridad en los procesos, los Certal Residual DNA Detection Kits incluyen el QIAGEN Internal Control, que está diseñado específicamente para permitir la interpretación correcta de los resultados negativos y para no interferir en el ensayo diana. El QIAGEN Internal Control se detecta de manera fiable cuando se coamplifica con ADN genómico (consulte la figura “ Detección fiable del QIAGEN Internal Control”).
Para garantizar que no haya en el material terapéutico final sustancias contaminantes provenientes de la línea celular del huésped utilizada para producir biofármacos, los Certal Residual DNA Detection Kits ofrecen un ensayo prediseñado para detectar específicamente ADN de células huésped de CHO. Cada Certal Residual DNA Assay consiste en un par de cebadores optimizados y una sonda de hidrólisis marcada como FAM para la detección fiable del ADN genómico residual de CHO. El ADN de fondo humano y el Certal Internal Control DNA no interferirán en el Certal Residual DNA Assay.
El Certal Internal Control Assay premezclado contiene un cebador directo e inverso y una sonda de hidrólisis con marcador MAX para la detección del Certal Internal Control DNA. Se ha optimizado específicamente para evitar la interferencia con los Certal Residual DNA Assays. El Certal Residual DNA Positive Control permite la interpretación correcta de los resultados negativos al comprobar la funcionalidad de la reacción de amplificación misma.
El Certal ResDNA PCR Buffer se ha optimizado para producir resultados sensibles y fiables de la real-time PCR cuantitativa doble. La mezcla maestra también contiene dUTP, lo que permite el pretratamiento con uracilo N-glicosilasa (UNG) antes de iniciar la PCR para garantizar que las reacciones de PCR posteriores no se vean afectadas por productos de PCR contaminantes.
Componente | Características | Beneficios |
Certal Residual DNA Assays y ADN de control | ||
---|---|---|
50x Certal Residual DNA Assay | Juego de cebadores y sondas prediseñado, optimizado y validado (marcado como FAM) | Detección fiable de ADN residual de célula huésped de CHO |
Certal Residual DNA Positive Control | ADN de control positivo que amplificará el Certal Residual DNA Assay | Verificación de que el Certal Residual DNA Assay funciona correctamente en caso de que no se detecte ADN residual de célula huésped en la muestra |
50x Certal Internal Control Assay | Juego de cebadores y sondas prediseñado, optimizado y validado (marcado como MAX) para la detección de Certal Internal Control DNA | Detección específica del Certal Internal Control DNA solamente. Optimizado para evitar la interferencia con los Certal Residual DNA Assays |
Certal Internal Control DNA | ADN de control interno que amplificará el Certal Internal Control Assay | Excluye la presencia de inhibidores de PCR o puede utilizarse para controlar la purificación y la amplificación cuando se añade durante el paso de purificación |
Certal ResDNA PCR Master Mix | ||
HotStarTaq DNA Polymerase | Activación de 15 min a 95 °C | Preparación de reacciones de qPCR a temperatura ambiente |
Certal ResDNA PCR Buffer | Una combinación equilibrada de iones de KCl y (NH4)2SO4 | La hibridación de cebadores específicos garantiza la fiabilidad de los resultados de la PCR |
Factor MP sintético | Análisis múltiple fiable de hasta 4 genes en el mismo tubo | |
Mezcla dNTP | Incluye dUTP, que sustituye parcialmente al dTTP y permite el tratamiento opcional con UNG | Eliminación eficaz del arrastre de productos de PCR cuando la reacción se somete a pretratamiento con uracilo N-glicosilasa (UNG) |
Componentes adicionales | ||
50x ROX Dye Solution | Tubo separado de colorante de referencia pasivo para la normalización de las señales fluorescentes en sistemas de real-time PCR Applied Biosystems 7500. Opcional: Se puede utilizar en instrumentos Stratagene de Agilent | Cuantificación precisa en termocicladores que requieren colorante ROX. No interfiere en la PCR en cualquier termociclador en tiempo real |
50x High-ROX Dye Solution | Tubo separado de colorante de referencia pasiva para la normalización de las señales fluorescentes en sistemas de real-time PCR Applied Biosystems 7900 y StepOne. | |
Uracilo N-glicosilasa (UNG) | Tubo separado de enzima recombinante pura y libre de nucleasas | Eliminación eficaz del arrastre de productos de PCR |
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer | Formulación de tampón patentada para la dilución y el almacenamiento de patrones de ácido nucleico | Estabiliza los patrones de ADN y ARN durante la preparación de la reacción y dilución y previene la pérdida de ácidos nucleicos en las superficies de plástico, como tubos o puntas de pipetas |
Los Certal Residual DNA Detection Kits ofrecen un procedimiento simple para la detección de ADN de célula huésped, el Certal Internal Control y el Certal Residual DNA Positive Control (consulte la figura Procedimiento del Certal Residual DNA Detection Kit). Solo debe mezclar la mezcla maestra con el Certal Residual DNA Assay, el Certal Internal Control Assay y el Certal Internal Control DNA y, luego, añadir su ADN de muestra o Certal Residual DNA Positive Control. El manual de uso del kit contiene protocolos optimizados para el uso con una amplia gama de termocicladores. El ROX se suministra en 2 tubos de diferentes concentraciones, lo que permite el uso en cualquier instrumento en tiempo real (consulte la tabla “Elegir la concentración de ROX correcta”).
Instrumento | Solución de colorante ROX | ||
No se necesita | Solución de colorante ROX | Solución de colorante ROX de alta concentración | |
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Rotor-Gene Q | X | ||
Rotor-Gene 6000 y Rotor-Gene 3000 | X | ||
Applied Biosystems 7500, ABI ViiA7 | X | ||
Applied Biosystems 7900HT, StepOne y StepOne Plus, ABI PRISM 7700, 7000 y 7300 | X | ||
Mx3000P, Mx3005P, Mx4000 | X | Opcional | |
iCycler iQ System | X | ||
LightCycler 480 | X |
Los Certal Residual DNA Detection Kits permiten la real-time PCR sensible utilizando sondas específicas de secuencia para la detección de ADN de célula huésped, incluido un control interno. Los kits pueden utilizarse en una gran variedad de termocicladores en tiempo real, incluidos los termocicladores de QIAGEN, Applied Biosystems, Bio-Rad, Roche y Agilent.
Los cebadores y la sonda del ensayo diana (CHO) y el ensayo de control interno se añaden a la Certal ResDNA Master Mix. Una vez que se han añadido el molde de control interno y el molde de la muestra, y se han distribuido las reacciones, se pueden ejecutar mediante una gran variedad de termocicladores. De manera opcional, se pueden comprobar los controles de CHO positivos y puede utilizarse UNG para controlar la contaminación causada por el arrastre de los productos de PCR.