El virus adenoasociado es un vector viral ampliamente usado en aplicaciones de terapia génica. Sin embargo, el proceso de generación y purificación de los vectores virales requiere un preciso control de calidad para permitir una dosificación segura y fiable durante los estudios clínicos o el cuidado de los pacientes. La capacidad para cuantificar con exactitud los títulos del vector, así como determinar si existe contaminación, es la clave para aplicar terapias génicas basadas en AAV seguras y eficaces.
Con la introducción del CGT Viral Vector Lysis Kit, que incluye reactivos para 100 o 1000 reacciones, ahora disponemos de un flujo de trabajo optimizado y normalizado para la lisis del vector viral a través de una forma exacta y precisa de determinar el título viral. El kit también es compatible con adenovirus.
Ofrecemos un flujo de trabajo completo, desde la lisis del AAV hasta la cuantificación del titulo viral a partir de lisados celulares. El CGT Viral Vector Lysis Kit, con su fórmula mejorada, proporciona una determinación coherente, robusta y exacta del titulo final. Trabajando en conjunto con los QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays, el QIAcuity Digital PCR System, QIAcuity Probe PCR Kit y QIAcuity Nanoplate 8.5K, ofrecen un flujo de trabajo de dPCR de principio a fin comparable al de la qPCR, pero proporcionando una cuantificación absoluta de las copias del genoma del vector AAV en su muestra.
La solución todo en uno para lisis de AAV proporciona:
El CGT Viral Vector Lysis Kit, junto con los QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays y celular y el QIAcuity Probe PCR Kit que realizan reacciones únicas o múltiples en los instrumentos QIAcuity, ofrece ahora un flujo de trabajo completo de título viral.
El principio de la reacción de dPCR en las nanoplacas se describe aquí.
El CGT Viral Vector Lysis Kit se suministra con reactivos para 100 o 1000 reacciones en dos cajas para vectores AAV. El kit es apto para la lisis de AAV2, AAV5, AAV6, AAV8 y AAV9. Los lisados están optimizados para los QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays en combinación con el QIAcuity Probe PCR Kit. Estos ensayos permiten aplicaciones de terapia celular y génica tanto únicas como múltiples, incluidas mediciones de títulos virales y número de copias del vector. El kit no incluye las enzimas de restricción (p. ej., Hpall) que se indican en el protocolo (incluido en la sección Recursos a continuación).
El CGT Viral Vector Lysis Kit se utiliza para la lisis de AAV y adenovirus para un rango de aplicaciones, incluidas las mediciones de títulos genómicos del vector viral y número de copias del vector.
Two AAV2 samples were processed using the CGT Viral Vector Lysis Kit and quantified using the QIAcuity Digital PCR instrument with 8.5k Nanoplates and the CGT dPCR Assays. The CGT dPCR Assays were run in triplex reactions in the FAM, HEX and Cy5 channels. The samples were serially diluted in 6 steps from 15,000 copies/µL down to 2.5 copies/µL with an R2=1.0 on 8.5k Nanoplates (A, B). Each dilution was measured in technical triplicates. Quantifications were performed with (+) and without (–) restriction digest of the ITR regions. (A) For the titration of a purified AAV2 reference standard sample, the CGT dPCR assays targeting the CMV enhancer bGH polyA regions were used. The expected copies are based on an ITR estimate determined by qPCR measurements from the reference standard supplier and not directly comparable to dPCR measurements. (B) For the titration of the AAV2-SV40 harvest sample, the CGT dPCR Assays targeting the SV40 promoter, SV40 polyA and bGH polyA regions were used.