MinElute PCR Purification Kit

Para la purificación de hasta 5 μg de productos de PCR (entre 70 bp y 4 kb) en volúmenes de elución bajos

✓ Procesamiento automático sin interrupción de pedidos en línea

✓ Servicio técnico y para productos experto y profesional

✓ Realización y repetición de pedidos rápidas y fiables

MinElute PCR Purification Kit (50)

Cat. No. / ID: 28004

50 MinElute Spin Columns, tampones, Collection Tubes (2 ml)

Preparaciones

250

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El MinElute PCR Purification Kit está concebido para su uso en aplicaciones de biología molecular. Este producto no está concebido para el diagnóstico, la prevención ni el tratamiento de enfermedades.

✓ Procesamiento automático sin interrupción de pedidos en línea

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✓ Realización y repetición de pedidos rápidas y fiables

Características

Volúmenes de elución muy bajos
Procedimiento rápido y manejo sencillo
Recuperaciones altas y reproducibles
Colorante de carga de gel para el análisis práctico de muestras

Detalles del producto

El MinElute PCR Purification Kit incluye columnas de centrifugación, tampones y tubos de recogida para la purificación basada en membrana de gel de sílice de productos de PCR de 70 bp-4 kb de tamaño. Las columnas de centrifugación se han diseñado para permitir la elución en volúmenes muy bajos (tan solo 10 μl), lo que genera altos rendimientos del ADN altamente concentrado. Un indicador de pH opcional permite determinar con facilidad el pH óptimo para la unión de ADN a la columna de centrifugación. El procedimiento se puede automatizar por completo en el instrumento QIAcube Connect.

Rendimiento

El procedimiento de purificación de PCR de MinElute elimina cebadores, nucleótidos, enzimas, aceites minerales, sales y otras impurezas de las muestras de ADN (consulte la figura «»).

El MinElute PCR Purification Kit incluye columnas de centrifugación para la limpieza de productos de PCR. Con el uso de una microcentrifugadora o un colector de vacío, se alcanza rápidamente una alta concentración del fragmento de ADN (70 bp–4 kb). (Los fragmentos de ADN superiores a 4 kb deben purificarse con el QIAquick PCR Purification Kit.)

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Eliminación eficiente de cebadores.

Principio

El MinElute PCR Purification Kit contiene un ensamblaje de membrana de sílice para la unión del ADN en tampón de alta salinidad y elución con tampón de baja salinidad o agua. La tecnología de membrana de sílice elimina los problemas e inconvenientes relacionados con las resinas sueltas y los residuos pastosos.

Colorante de carga de gel

Para que el procesamiento y el análisis de las muestras sean más rápidos y prácticos, se proporciona el colorante de carga de gel. El GelPilot Loading Dye contiene tres colorantes de seguimiento (xileno cianol, azul de bromofenol y naranja G) para facilitar la optimización del tiempo de la serie del gel de agarosa y evitar que los fragmentos más pequeños de ADN migren demasiado lejos (consulte la figura « GelPilot Loading Dye »).

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GelPilot Loading Dye.

Procedimiento

El sistema MinElute emplea un sencillo procedimiento de unión, lavado y elución. El tampón de unión se añade directamente a la muestra de PCR u otra reacción enzimática y la mezcla se aplica a la MinElute Spin Column. El tampón de unión contiene un indicador de pH, lo que permite determinar con facilidad el pH óptimo para la unión del ADN (consulte la figura «Colorante indicador de pH»). Los ácidos nucleicos se adsorben a la membrana de sílice en las condiciones de alta salinidad generadas por el tampón. Las impurezas se lavan y el ADN puro se eluye con un volumen pequeño de tampón suministrado de baja salinidad o agua, listo para usarse en aplicaciones posteriores.

Manejo

Las MinElute Spin Columns se han diseñado con dos prácticas opciones de manejo (consulte el diagrama de flujo «Procedimiento de MinElute»). Las columnas de centrifugación se adaptan a una microcentrifugadora de mesa convencional o a cualquier colector de vacío con conectores Luer, como QIAvac 24 Plus, y también se pueden automatizar por completo en el instrumento QIAcube Connect (consulte las figuras «Opciones de manejo de la columna de centrifugación A y B» y « QIAcube Connect»).

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Colorante indicador de pH.

Opciones de manejo de la columna de centrifugación — A.

Opciones de manejo de la columna de centrifugación — B.

QIAcube Connect.

Aplicaciones

Los fragmentos de ADN purificados con el sistema MinElute están listos para su uso directo en todas las aplicaciones, incluyendo las indicadas a continuación:

Secuenciación, incluida la secuenciación de nueva generación
Análisis de micromatrices
Ligación y transformación
Digestión de restricción
Marcado

Datos y cifras de respaldo

Eliminación eficiente de cebadores.

Análisis de productos de PCR antes (b) y después (a) de la purificación con el MinElute PCR Purification Kit. Las muestras se analizaron en un gel de agarosa con TAE al 1,2 %. M: marcadores.

Specifications

Features	Specifications
Binding capacity	5 µg
Sample type: applications	ADN, oligonucleótidos: Reacciones de PCR
Elution volume	10 µl
Fragment size	70 bp–4 kb
Recovery: oligonucleotides dsDNA	Recuperación: oligonucleótidos, ADNbc
Format	Tubo
Technology	Tecnología de sílice
Processing	Manual
Removal <10mers 17–40mers dye terminator proteins	Eliminación, <40 mers

Recursos

Publications

Factors involved in root formation in Medicago truncatula.

Imin N; Nizamidin M; Wu T; Rolfe BG;

J Exp Bot; 2006; 58 (3):439-51 2006 Dec 6 PMID:17158109

Expression of c-kit in human osteosarcoma and its relevance as a prognostic marker.

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J Clin Pathol; 2006; 60 (7):804-7 2006 Oct 3 PMID:17018686

Application of microdroplet PCR for large-scale targeted bisulfite sequencing.

Komori HK; LaMere SA; Torkamani A; Hart GT; Kotsopoulos S; Warner J; Samuels ML; Olson J; Head SR; Ordoukhanian P; Lee PL; Link DR; Salomon DR;

Genome Res; 2011; 21 (10):1738-45 2011 Jul 14 PMID:21757609

A new fractionation assay, based on the size of formaldehyde-crosslinked, mildly sheared chromatin, delineates the chromatin structure at promoter regions.

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Transcriptional organization, regulation and role of the Porphyromonas gingivalis W83 hmu haemin-uptake locus.

Lewis JP; Plata K; Yu F; Rosato A; Anaya C;

Microbiology (Reading); 2006; 152 (Pt 11):3367-3382 2006 Nov PMID:17074906

FAQ

The MinElute spin columns included in the following kits should be stored at 2–8°C upon arrival: AllPrep DNA/RNA Micro, EpiTect Fast DNA Bisulfite, EpiTect Fast FFPE Bisulfite, EpiTect Fast LyseAll Bisulfite, EpiTect Plus DNA Bisulfite, EpiTect Plus FFPE Bisulfite, EpiTect Plus LyseAll Bisulfite, exoRNeasy Serum/plasma Maxi, exoRNeasy Serum/Plasma Midi, GeneRead DNA FFPE, GeneRead rRNA Depletion, GeneRead Size Selection, MinElute Gel Extraction, MinElute PCR Purification, MinElute Reaction Cleanup, miRNeasy FFPE, miRNeasy Micro, miRNeasy Serum/Plasma, QIAamp DNA FFPE, QIAamp DNA Investigator, QIAamp DNA Micro, QIAamp MinElute Media, QIAamp MinElute Virus Spin, QIAamp MinElute Virus Vacuum, RNeasy FFPE, RNeasy Micro, RNeasy Plus Micro.

Short-term storage (up to 4 weeks) at room temperature (15–25°C) does not affect the performance. However, for optimal performance and quality, storage temperature should not exceed 25°C.

FAQ ID - 3560

CoralLoad dyes supplied in PCR Kits such as, e.g., Taq, HotStarTaq, and TopTaq DNA Polymerase and TopTaq Master Mix do not interfere with most downstream enzymatic applications.

However, for reproducible results, purification of PCR products using the QIAquick or MinElute PCR Purification Kits prior to enzymatic manipulation is recommended.

FAQ ID -1745

Buffer PB contains a high concentration of guanidine hydrochloride and isopropanol. The exact composition of Buffer PB is confidential. However, this buffer can be purchased separately: Buffer PB.

FAQ ID -2791

No - mineral oil will not affect the clean-up procedure with the QIAquick or MinElute PCR Purification Kit.

FAQ ID -575

Yes, and therefore they are interchangeable.

FAQ ID -581

DNA fragments purified with the QIAGEN DNA Cleanup Systems, i.e., the QIAquick PCR Purification Kit, the MinElute Reaction Cleanup Kit, the QIAEX II Gel Extraction Kit etc. may float out of the loading wells of agarose gels due to residual ethanol carried over from the wash step with Buffer PE (despite the addtition of glycerol-containing loading buffer).

Use either of the following options to remove residual ethanol from the eluate:

re-purify the sample using a QIAquick-, or MinElute column, or QIAEX II resin
incubate the eluate at 56°C for 10 min to evaporate the ethanol
dry down the sample in a vacuum centrifuge, and resuspend the pellet in a small volume of sterile water

FAQ ID -205

As a rule of thumb, single-stranded DNA binds to silica with approximately half the affinity of a double-stranded DNA fragment of the same length under the buffer conditions used in the QIAquick and MinElute Kits. Even though no systematic experimental data exists, we expect that recovery of ssDNA fragments of approximately 200 nucleotides and below will not be very efficient after cleanup using the QIAquick PCR Purification Kit or MinElute PCR Purification Kit. By comparison, it should be possible to purify fragments longer than 140 nucleotides using the QIAquick Gel Extraction Kit.

Note that recovery of single strand DNA is influenced to some degree also by factors such as base composition and secondary structure. It has to be determined empirically by the researcher if cleanup of single-stranded DNA with QIAquick columns yields satisfactory results.

FAQ ID -759

The composition of Buffer EB is:

10 mM Tris-Cl, pH 8.5

Buffer EB is the elution buffer used in the QIAquick PCR, Gel Extraction, Nucleotide Removal Kits, and MinElute Kits for DNA cleanup, and the QIAprep Miniprep Kits for small-scale plasmid purification. The purified DNA can also be eluted in TE (10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA, pH 8.0), but the EDTA may inhibit subsequent enzymatic reactions.

FAQ ID -199

Yes, please follow the User-developed protocol 'Forensic post-PCR purification protocol using the MinElute PCR Purification Kit' (ME01).

FAQ ID -1761

Occasionally, DNA fragments eluted from the silica matrix of QIAquick, MinElute or QIAEX II Kits will contain denatured single-stranded DNA (ssDNA), appearing as a smaller band on an analytical gel. Under certain conditions, chaotropic agents (present in all silica-based DNA purification methods) can denature DNA fragments. This is a rare event that may be influenced by sequence characteristics such as the presence of inverted repeats or A–T-rich stretches.

Because salt and buffering agents promote renaturation of DNA strands, the following tips are recommended:

use the eluted DNA to prepare your downstream enzymatic reaction, but omit the enzyme. Incubate the reaction mix at 95°C for 2 minutes to reanneal the ssDNA, and allow the tube to cool slowly to room temperature before adding the enzyme and proceeding
alternatively, the DNA can be eluted from the silica-gel membrane or resin in 10 mM Tris buffer containing 10 mM NaCl. However, the salt concentration of the eluate must then be taken into consideration in downstream applications.

FAQ ID -148

The QIAquick Spin Columns (100) (cat. no. 28115) in the QIAquick PCR Purification, Gel Extraction, Nucleotide Removal and PCR & Gel Cleanup kits are also sold separately from the kits.

The MinElute columns in the MinElute PCR Purification, Gel Extraction and Reaction Cleanup kits are not sold separately.

We always provide extra buffers in our kits so you can scale up reactions, add extra washes or allow for spillage.

FAQ ID -2460