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QuantiTect Virus Kit (1000)
Cat. No. / ID: 211015
Für 1000 × 50-µl-Reaktionen: QuantiTect Virus Master Mix (enthält ROX-Farbstoff), QuantiTect Virus RT Mix, RNase-freies Wasser, QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer
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Referenzfarbstoff
Rox in Mastermix
Rox in vial
Reaktionen
1000
200
50
QuantiTect Virus Kits sind für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Diese Produkte sind nicht zur Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Erkrankung vorgesehen.
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Eigenschaften
- Hohe Sensitivität in Single- und Multiplex-Assays
- Nachweis von viraler RNA und/oder DNA in der gleichen Reaktion
- Eindeutiger Nachweis von schwach-positiven Signalen
- Schnelle, universelle 2-Schritt-Protokolle
- 5x Master-Mix für höhere Sensitivität bei größeren Probenmengen
Angaben zum Produkt
Das QuantiTect Virus Kit wurde speziell für den hoch sensitiven Nachweis von bis zu 4 viralen Nukleinsäurezielen mittels Ein-Schritt-Real-time-RT-PCR im Multiplex-Format unter Verwendung sequenzspezifischer Sonden entwickelt. Mehrere virale RNA- und/oder DNA-Ziele sowie interne Kontrollen können in einem einzelnen Röhrchen ohne Sensitivitätsverlust nachgewiesen werden. Der konzentrierte 5x Master-Mix ermöglicht die Zugabe einer höheren Probenmenge und enthält HotStarTaq Plus DNA Polymerase. Der QuantiTect Virus RT Mix enthält eine einzigartige Formulierung von Sensiscript Reverse Transcriptase, die für den hoch sensitiven Nachweis viraler RNA optimiert ist. Es sind zwei Kit-Formate erhältlich: das QuantiTect Virus Kit für Thermocycler, die ROX-Farbstoff zur Fluoreszenznormalisierung benötigen, und das QuantiTect Virus +ROX Vial Kit für andere Thermocycler. Der Master-Mix kann bei 2–8 °C gelagert werden.
Leistung
Die Amplifikation mit QuantiTect Virus Kits liefert steile sigmoidale Kurven über einen weiten Verdünnungsbereich, selbst bei geringen Template-Mengen mit hohen CT-Werten (siehe Abbildung „ Eindeutige Bestimmung der CT-Werte über einen breiten dynamischen Bereich“). Dies ermöglicht die genaue Bestimmung des CT-Werts bei der Quantifizierung viraler Nukleinsäuren mittels Real-time-PCR.
Multiplex-Assays ermöglichen den Nachweis mehrerer viraler RNA- und/oder DNA-Ziele sowie interner Kontrollen über einen breiten linearen Bereich ohne Verlust an Sensitivität (siehe Abbildungen „ Zuverlässiger Nachweis viraler RNA über einen breiten linearen Bereich“ und „ Verbesserter Nachweis geringer Mengen viraler RNA“).
Der in den Kits enthaltene QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer stabilisiert die RNA- und DNA-Standards während der Verdünnung und des Reaktionsansatzes und verhindert den Verlust von Nukleinsäuren durch Adsorption an Kunststoffoberflächen, wie z. B. Röhrchen oder Pipettenspitzen. Der Puffer ermöglicht eine zuverlässige Verdünnung von Standards, die zur Quantifizierung viraler Nukleinsäuren verwendet werden, und bietet so einen breiten linearen Bereich, der von niedrigen bis zu hohen CT-Werten reicht. Außerdem ermöglicht er eine längere Lagerung der Standards ohne Abbau (siehe Abbildung „ Zuverlässige Verdünnung und Lagerung von RNA-Standards“).
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Prinzip
Die QuantiTect Virus Kits ermöglichen auf Anhieb einen hoch sensitiven Nachweis viraler Nukleinsäuren in Singleplex- oder Multiplex-Assays (siehe Flussdiagramm „ QIAGEN Multiplex-Kits“). Der optimierte Master-Mix sorgt dafür, dass die PCR-Produkte in einer Multiplex-Reaktion mit der gleichen Effizienz und Sensitivität amplifiziert werden wie die PCR-Produkte in einer entsprechenden Singleplex-Amplifikationsreaktion.
Die Amplifikation von Kontroll- und Zielgenen in derselben Reaktion statt in getrennten Reaktionen erhöht die Zuverlässigkeit der Genquantifizierung, da Handhabungsfehler minimiert werden. Der QuantiTect Virus Buffer enthält eine ausgewogene Kombination aus K+- und NH4+-Ionen sowie den einzigartigen synthetischen Faktor MP. Zusammen sorgen sie für eine stabile und effiziente Hybridisierung der Primer und Sonden an das Nukleinsäure-Template und gewährleisten so eine hohe PCR-Effizienz (siehe Abbildung „ Einzigartiger PCR-Puffer“). Darüber hinaus sorgt die einzigartige Formulierung der Sensiscript Reverse Transcriptase für eine hoch sensitive reverse Transkription viraler RNA, während die HotStarTaq Plus DNA Polymerase einen stringenten Hot-Start gewährleistet und die Bildung unspezifischer Produkte verhindert.
| Kit-Komponente | Eigenschaft | Vorteile | |
|---|---|---|---|
| 5x QuantiTect Virus Master Mix | Konzentrierter Master-Mix | Hochkonzentriert und optimiert für den sensitiven Virusnachweis | Zur Erhöhung der Sensitivität können dem Assay größere Volumen an Template zugegeben werden |
| HotStarTaq Plus DNA Polymerase | Aktivierung innerhalb von 5 Minuten bei 95 °C | Ansatz der qPCR-Reaktionen bei Raumtemperatur | |
| QuantiTect Virus Buffer | Ausgewogene Kombination von NH4+- und K+-Ionen | Spezifische Primerhybridisierung für zuverlässige PCR-Ergebnisse | |
| Synthetischer Faktor MP | Zuverlässige Multiplex-Analyse von bis zu 4 Genen in einem Röhrchen | ||
| Zusätzliche Kit-Komponenten | QuantiTect Virus RT Mix | Enthält eine einzigartige Formulierung der Sensiscript Reverse Transcriptase | Optimiert für den hoch sensitiven Nachweis von viraler RNA |
| QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer | Proprietäre Pufferformulierung für die Verdünnung und Lagerung von Nukleinsäurestandards. | Stabilisiert RNA- und DNA-Standards während der Verdünnung und des Reaktionsansatzes und verhindert den Verlust von Nukleinsäuren durch Adsorption an Kunststoffoberflächen, wie z. B. Röhrchen oder Pipettenspitzen |
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Verfahren
QuantiTect Virus Kits ermöglichen eine hoch sensitive Real-time-PCR-Analyse von viralen Nukleinsäuren (RNA und/oder DNA) und internen Kontrollen unter Verwendung sequenzspezifischer Sonden. Die Reaktionen können mit oder ohne reverse Transkription durchgeführt werden. Dies ermöglicht ein flexibles Design von Multiplex-Assays zum Nachweis von RNA-Zielen, DNA-Zielen oder sowohl RNA- als auch DNA-Zielen. Befolgen Sie das Protokoll im Handbuch für schnelle und zuverlässige Ergebnisse.
Die Kits sind mit oder ohne passiven Referenzfarbstoff ROX im Master-Mix erhältlich (siehe Tabelle).
| ROX-Farbstoff | Kit | Kompatible Thermocycler |
|---|---|---|
| Im Master-Mix enthalten | QuantiTect Virus Kit | Alle Thermocycler von Applied Biosystems außer Applied Biosystems 7500 |
| Wird in einem separaten Röhrchen geliefert | QuantiTect Virus +ROX Vial Kit | Applied Biosystems 7500 und Thermocycler von Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, QIAGEN, Roche, Agilent und anderen Herstellern |
Für schnelle und hoch sensitive Endpunkt-Ein-Schritt-RT-PCR-Anwendungen, einschließlich des Nachweises von Viren, empfehlen wir das QIAGEN OneStep RT-PCR Kit.
Anwendungen
Die QuantiTect Virus Kits ermöglichen eine hoch sensitive Real-time-PCR im Single- oder Multiplex-Format oder eine Ein-Schritt-RT-PCR mit sequenzspezifischen Sonden für den Nachweis von viraler DNA und/oder RNA sowie interner Kontrollen. Die Kits können auf einer Vielzahl von Real-time-Thermocyclern eingesetzt werden, darunter Geräte von Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, QIAGEN, Roche (außer Kapillar-Thermocycler) und Agilent.
Ergänzende Daten und Abbildungen
Eindeutige Bestimmung der CT-Werte über einen breiten dynamischen Bereich
Serielle Verdünnungen der RNA des Bovinen Virusdiarrhoe-Virus (BVDV) wurden wie angegeben amplifiziert und mit dem QuantiTect Virus Kit analysiert. Die steilen sigmoidalen Kurven ermöglichen eine genaue Bestimmung des CT-Werts, selbst bei geringen Template-Mengen (10 Kopien/μl). [A] Nachweis von BVDV1-RNA. [B] Nachweis von BVDV2-RNA. NTC: No template control (Kontrolle ohne Template).
Specifications
| Features | Specifications |
|---|---|
| Applications | Virusnachweis |
| SYBR Green I or sequence-specific probes | Sequenzspezifische Sonden |
| Real-time or endpoint | Real-time |
| Reaction type | Reverse Transkription und PCR |
| Thermal cycler | Die meisten Real-time-Thermocycler (außer Kapillar-Thermocycler, z. B. LightCycler® 1.x und 2.0) |
| Sample/target type | RNA- und/oder DNA-Ziele |
| With or without ROX | Erhältlich mit ROX im Master-Mix und ROX in einem separaten Röhrchen |
| Single or multiplex | Single- oder Multiplex |
Ressourcen
Brochures & Guides (1)
Supplementary Protocols (5)
Safety Data Sheets (1)
Kit Handbooks (1)
Certificates of Analysis (1)
FAQ
How do I setup and validate a multiplex PCR assay with QIAGEN PCR kits?
Can I use uracil-N-glycosylase (UNG) with the QuantiFast and Rotor-Gene PCR kits?
Why do I see multiple high-intensity peaks in my qPCR dissociation curve at temperatures less than 70ºC?
How do I quantify gene expression levels if the amplification efficiencies are different between the genes of interest and endogenous reference gene?
What is the threshold cycle or Ct value?
What do I do if no fluorescent signal is detected in a real-time PCR assay?
How do I select appropriate reporter and quencher combinations for multiplex PCR?
Can I skip the gDNA wipeout buffer treatment step for the QuantiTect Reverse Transcription Kit?
How should I handle and store absolute quantitation standards for real-time experiments?
How do I ensure reliable results for High Resolution Melting (HRM) assays?
Why should DNA or cDNA targets be less than 250 bp long for real-time PCR?
What is the difference between QuantiTect Virus Kit and the new QuantiFast Pathogen +IC Kits?
Can the Internal Controls be ordered separately in the QuantiFast Pathogen + IC kit for use during purification?
How do I avoid collecting a fluorescence reading from primer-dimer with the QuantiTect SYBR Green PCR Kit?