Ultrapure 100 Buffer Set

• Aufreinigung von <0,1 EU/g Plasmid-DNA
• Aufreinigung von bis zu 100 mg ultrareiner Plasmid-DNA

Das Ultrapure 100 Buffer Set umfasst eine Reihe von Puffern zum Einsatz mit dem Ultrapure 500 Resin. Es können bis zu 100 mg endotoxinfreie (<0,1 EU/µg DNA) Plasmid-DNA einfach und effizient aufgereinigt werden. Das System nutzt die QIAGEN-Anionenaustauschtechnologie mit integrierter Endotoxinbeseitigung zur Gewinnung ultrareiner DNA.

Das Ultrapure 100 Buffer Set enthält Puffer mit einem zertifizierten Gehalt von <10 EU/ml ( gemäß dem BioWhittaker Kinetic-QCLTest) zur Verwendung mit dem Harz.

Der Grad der Endotoxin-Kontamination in aufgereinigter Plasmid-DNA hängt vom verwendeten Aufreinigungsverfahren ab. Mit Silika aufgeschlämmte DNA weist extrem hohe Endotoxinwerte auf. QIAGEN, QIAfilter und HiSpeed Plasmid Kits sowie zweimalige CsCl-Ultrazentrifugation ergeben sehr reine DNA mit relativ geringen Endotoxinwerten. Das QIAGEN Ultrapure 100 System umfasst einen integrierten Schritt zur Endotoxinentfernung, um Plasmid-DNA mit einem Anteil von <0,1 EU/g Plasmid-DNA zu erhalten.

Endotoxine, auch bekannt als Lipopolysaccharide oder LPS, sind Bestandteile der Zellmembran gramnegativer Bakterien wie E. coli (siehe Abbildung „ Bakterielle Zellwand“). Während der Lysephase der Plasmidaufreinigung werden Endotoxine freigesetzt, die bei endotoxinempfindlichen Zelllinien die Effizienz der Transfektion erheblich verringern. Außerdem können Endotoxine die Aufnahme von Plasmid-DNA in Transfektionsexperimenten beeinflussen, indem sie mit der DNA um “freies” Transfektionsreagenz konkurrieren. Endotoxine lösen auch eine unspezifische Aktivierung von Immunreaktionen in Immunzellen wie Makrophagen und B-Zellen aus, was zu einer Fehldeutung der Transfektionsergebnisse führen kann. Zu diesen Folgen gehört die induzierte Synthese von Proteinen und Lipiden wie IL-1 und Prostaglandin. Insgesamt stellen Endotoxine beim Aufbau von Transfektionsexperimenten eine nicht beeinflussbare Variable dar, die das Resultat und die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse beeinflusst und deren Vergleich und Interpretation erschwert. In der Gentherapieforschung können Endotoxine durch Auslösung des endotoxischen Schocksyndroms und Aktivierung der Komplementkaskade Störeinflüsse verursachen.

Das Ultrapure 100 Buffer Set mit dem Ultrapure 500 Resin liefert Plasmid-DNA von einer Reinheit, die mindestens der einer zweimaligen CsCl-Gradientenzentrifugation entspricht. Der einfache Schritt zur Endotoxinentfernung gewährleistet, dass die aufgereinigte DNA <0,1 EU/µg DNA aufweist. Daher eignet sich die DNA auch für empfindliche Anwendungen:

• Plasmid-vermitteltes Gen-Silencing
• Transfektion
• Gentherapie-Forschung