DyeEx Kits

• Schnelles Verfahren mit nur zwei kurzen Zentrifugationsschritten
• Gebrauchsfertiges, vorhydriertes Gelfiltrationsmaterial
• Effiziente Entfernung aller Farbstoffterminatoren

DyeEx Kits enthalten entweder Spin-Säulen oder 96-Well-Platten und verwenden eine Gelfiltrationstechnologie für die Entfernung von Farbstoffterminatoren aus Sequenzierreaktionen, einschließlich Reaktionen für die Sanger-Sequenzierung. Die Sequenzierreaktionen werden auf das vorhydrierte Gelfiltrationsmaterial geladen. Nach einem kurzen Zentrifugationsschritt können die Reaktionen in einen Kapillarsequenzierer geladen werden. Nicht inkorporierte Farbstoffterminatoren werden in der Gelmatrix zurückgehalten.

DyeEx Kits entfernen jede Art von Farbstoffterminator aus 10–20 µl Sequenzierreaktionen, einschließlich BigDye, dRhodamin-Farbstoff, Rhodamin, DYEnamic ET und WellRED Terminatoren. Nach dem Cleanup können die Sequenzierreaktionen auf jedem Kapillarsequenzierer aufgetrennt werden. Wir empfehlen das DyeEx 96 Kit in Verbindung mit dem optimierten Protokoll.

Hochqualitative Sequenzierung

DyeEx Kits sind für die schnelle und bequeme Entfernung von Farbstoffterminatoren optimiert, was qualitativ hochwertige Sequenzierergebnisse ermöglicht. Im Gegensatz dazu ist ein Cleanup der Sequenzierreaktion durch Ethanolpräzipitation sehr zeitaufwendig (siehe Tabelle „DyeEx-Verfahren und Ethanolpräzipitation im Vergleich“) und ineffizient. Wenn Farbstoffterminatoren nicht effizient entfernt werden, treten häufig Farbflecken („dye blobs“) in den Sequenzierungsdaten auf, die Abschnitte der Sequenz unlesbar machen. DyeEx Kits zum Cleanup von Sequenzierreaktionen stellen sicher, dass die auf Sequenziergeräte geladenen Reaktionen frei von Farbstoffterminatoren sind. Ohne Farbflecken ist die Sequenz durchgängig gut lesbar (siehe Abbildung  „Überlegene Sequenzierergebnisse“). Die Signalintensitäten sind hoch, was lange Leselängen ermöglicht (siehe Abbildung  „Lange Lesesequenz“).

DyeEx-Verfahren und Ethanolpräzipitation im Vergleich

n. z.: nicht zutreffend.

* Ohne die Zeit, die benötigt wird, um die Proben vor dem Beladen des Gels zu trocknen (sofern zutreffend).
† Mit dem Standardprotokoll.

Das DyeEx-Verfahren nutzt die Gelfiltration, um nicht inkorporierte Terminatoren schnell und effizient aus Sequenzierreaktionen zu entfernen. Die Entfernung der Farbstoffterminatoren ist wichtig, um zu verhindern, dass nicht inkorporierte Farbstoffterminatoren die Analyse der Sequenzierergebnisse beeinträchtigen. Das Material für die DyeEx-Gelfiltration besteht aus Kugeln mit einheitlichen Poren und trennt die Moleküle nach ihrem Molekulargewicht. Wenn Sequenzierreaktionsmischungen auf DyeEx-Säulen aufgetragen werden, diffundieren Farbstoffterminatoren in die Poren und werden im Gelfiltrationsmaterial zurückgehalten, während markierte DNA-Fragmente abgetrennt und aus dem Durchfluss gewonnen werden können (siehe Abbildung  „DyeEx-Trennprinzip“).

DyeEx Kits entfernen die Farbstoffterminatoren schnell, da das Verfahren so einfach ist (siehe Flussdiagramme  „DyeEx 2.0 Spin-Verfahren“ und  ”DyeEx 96 Kit-Verfahren”). In einem schnellen Zentrifugationsschritt wird der Aufbewahrungspuffer aus den Säulen bzw. Wells entfernt, die Sequenzierproben werden geladen und ein zweiter Zentrifugationsschritt entfernt die nicht inkorporierten Farbstoffterminatoren. Die Proben können dann direkt in einen Kapillarsequenzierer geladen oder getrocknet, wieder gelöst und auf ein Sequenziergel geladen werden.

DyeEx Kits entfernen jede Art von Farbstoffterminator aus 10–20 µl Sequenzierreaktionen, einschließlich BigDye, dRhodamin-Farbstoff, Rhodamin, DYEnamic ET und WellRED Terminatoren. Nach dem Cleanup können die Sequenzierreaktionen auf jedem Kapillarsequenzierer aufgetrennt werden. Die Signalintensitäten sind hoch, was lange Leselängen ermöglicht.