Qproteome Cell Compartment Kit

Für die Fraktionierung von Proteinen nach ihrer zellulären Lokalisierung

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Qproteome Cell Compartment Kit

Cat. No. / ID: 37502

Für bis zu 10 subzelluläre Fraktionierungen: Extraktionspuffer, Proteaseinhibitorlösung, Benzonase®.

Qproteome Cell Compartment Kit ist für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Dieses Produkt ist nicht für die Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Krankheit bestimmt.

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Angaben zum Produkt

Eukaryotische Zellen sind komplexe, streng geordnete und hoch strukturierte Systeme. Das Cell Compartment Kit wurde für die schnelle und einfache subzelluläre Fraktionierung von intakten eukaryotischen Zellen und Geweben entwickelt. Durch sequenzielle Zugabe verschiedener Extraktionspuffer zu einem Zellpellet können Proteine in den verschiedenen Zellkompartimenten selektiv isoliert werden.

Leistung

Die Verwendung des Qproteome Cell Compartment Kit ermöglicht die einfache und effektive Zellkompartiment-spezifische Lokalisierung von Markerproteinen aus isolierten Zellen (siehe Abbildung „“ und „“) oder aus Gewebeproben (siehe Abbildung „“).

Abbildungen ansehen

Spezifische Trennung von Markerproteinen.

Lokalisierung von Proteinen in Zellen unter verschiedenen Wachstumsbedingungen.

Lokalisierung von Proteinen in Gewebeproben.

Prinzip

Das Kit enthält 4 Extraktionspuffer, welche die sequenzielle Isolierung von Proteinen, die mit dem Zytosol, den Membranen, dem Zellkern und dem Zytoskelett assoziiert sind, aus Zelllysaten oder Geweben ermöglichen.

Verfahren

Die 4 Extraktionspuffer werden nacheinander einem Zellpellet zugesetzt und die entsprechenden Fraktionen werden durch Zentrifugation isoliert (siehe Flussdiagramm).

In einem alternativen Protokoll für Gewebe werden die Proben mit dem TissueRuptor gleichzeitig homogenisiert und aufgeschlossen, bevor sie wie ein Zellpellet verarbeitet werden.

Abbildungen ansehen

Flussdiagramm

Anwendungen

Die subzelluläre Fraktionierung von Proteinen kann zur Anreicherung von in geringen Mengen vorliegenden Spezies, zur Bestimmung der subzellulären Lokalisierung von Enzymen, regulatorischen und strukturellen Proteinen und zur Überwachung der kompartimentellen Umverteilung von Biomolekülen unter basalen und stimulierten Bedingungen verwendet werden.

Ergänzende Daten und Abbildungen

Lokalisierung von Proteinen in Zellen unter verschiedenen Wachstumsbedingungen.

Mikroskopische Aufnahmen (obere Abbildungen) von HeLa-Zellen [A] unter normalen Wachstumsbedingungen und [B] nach 4-stündiger Inkubation mit Staurosporin, einem Apoptoseinduktor. Die unteren Abbildungen zeigen Western Blots, die nach Verarbeitung der Zelllysate mit dem Qproteome Cell Compartment Kit erstellt wurden. Die Blots wurden mit Anti-Cytochrom C-Antikörpern untersucht. Es ist bekannt, dass Cytochrom C während der Apoptose vom Intermembranraum der Mitochondrien ins Zytosol transloziert wird, ein Prozess, der sich im Nachweis von Cytochrom C in der Zytosolfraktion apoptotischer Zellen widerspiegelt.

Specifications

Features	Specifications
Applications	SDS-PAGE, Massenspektrometrie
Fractions isolated	Vier Fraktionen
Start material	Zelllysat
Sample size	~5 x 10e6 Zellen
Binding capacity/yield	Variiert
Species	Eukaryoten

Ressourcen

For the subcellular fractionation of proteomic
samples

FAQ

The Qproteome Cell Compartment Kit, the Qproteome Nuclear Protein Kit, the Qproteome Mitochondria Isolation Kit, and the PhosphoProtein Purification Kit are compatible with tissue samples. The respective protocol can be found in the respective handbook.

The Qproteome Mammalian Protein Prep Kit is also compatible with tissue, there is the QIAGEN Supplementary Protocol: Purification of protein from animal tissues using the Qproteome Mammalian Protein Prep Kit and the TissueRuptor™ available. For all these protocols the TissueRuptor is used.

FAQ ID -755

No, none of the buffers of the Qproteome Cell Compartment Kit contain reducing agents.

FAQ ID -824

Acetone precipitation recommended in the protocols for the Qproteome Protein Fractionation Kits leaves most proteins in a native state. Some proteins may partially denature when precipitating with acetone.

FAQ ID -807

We have not tested immunoprecipitation on protein fractions from the Qproteome Cell Compartment Kit. However, since Buffers CE1, CE2 and CE3 are native buffers, we would expect that they would work for this application. It might be a good idea to dilute the fractions 1:1 with a buffer already tested for immunoprecipitation to adjust to IP conditions. Buffer CE4 is strongly denaturing, so the final protein fraction 4 may not be used for immunoprecipitation.

FAQ ID -855

The following protocol is suitable for concentrating and desalting protein samples for downstream applications such as 2D-PAGE:

Add four volumes of ice-cold 100% acetone to the protein fraction and incubate for 15 minutes on ice
Centrifuge for 10 minutes at 12,000 x g in a pre-cooled microcentrifuge at 4°C
Discard the supernatant and air dry the pellet
Resuspend the pellet in an appropriate sample buffer required for the downstream application

You will find this protocol also in the handbooks for QIAGEN's QProteome Protein Fractionation Kits.

FAQ ID -1035

Endosomal, microsomal and lysosomal proteins will be present in membrane protein fraction 2, as organelles remain intact after addition of Buffer CE1 during the first fractionation step with the Qproteome Cell Compartment Kit.

FAQ ID -808

Soluble mitochondrial proteins will be present in membrane protein fraction 2 when using the Qproteome Cell Compartment Kit.

FAQ ID -839