MinElute PCR Purification Kit zur Aufreinigung von PCR-Produkten

Zur Aufreinigung von bis zu 5 μg PCR-Produkten (70 bp bis 4 kb) in geringen Elutionsvolumen

✓ Automatische Verarbeitung von Online-Bestellungen 24/7

✓ Sachkundiger und professioneller technischer und Produkt-Support

✓ Schnelle und zuverlässige (Nach-)Bestellung

MinElute PCR Purification Kit (50)

Cat. No. / ID: 28004

50 MinElute Spin Columns, Puffer, Sammelröhrchen (2 ml)

Präparationen

250

Inquire

MinElute PCR Purification Kit ist für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Dieses Produkt ist nicht für die Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Krankheit bestimmt.

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Eigenschaften

Sehr kleine Elutionsvolumen
Schnelles Verfahren und einfache Handhabung
Hohe, reproduzierbare Rückgewinnung
Gel-Ladefarbstoff für komfortable Probenanalyse

Angaben zum Produkt

Das MinElute PCR Purification Kit enthält Spin-Säulen, Puffer und Sammelröhrchen für die Silikamembran-basierte Aufreinigung von PCR-Produkten mit einer Größe von 70 bp bis 4 kb. Die Spin-Säulen wurden für die Elution in sehr kleinen Volumen (bis zu 10 μl) entwickelt und liefern hohe Ausbeuten an hochkonzentrierter DNA. Ein optionaler pH-Indikator ermöglicht die einfache Bestimmung des optimalen pH-Werts für die DNA-Bindung an die Spin-Säule. Das Verfahren kann auf dem QIAcube Connect vollständig automatisiert werden.

Leistung

Die MinElute PCR-Aufreinigung entfernt Primer, Nukleotide, Enzyme, Mineralöl, Salze und andere Verunreinigungen aus DNA-Proben (siehe Abbildung „“).

Das MinElute PCR Purification Kit enthält Spin-Säulen für das Cleanup von PCR-Produkten. Mithilfe einer Mikrozentrifuge oder eines Vakuumverteilers können schnell hohe Konzentrationen an DNA-Fragmenten (70 bp – 4 kb) erreicht werden. (DNA-Fragmente größer als 4 kb sollten mit dem QIAquick PCR Purification Kit aufgereinigt werden.)

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Effiziente Primerentfernung

Prinzip

Das MinElute PCR Purification Kit enthält eine Silika-Membraneinheit für die Bindung von DNA in Hochsalzpuffer und die Elution mit Niedrigsalzpuffer oder Wasser. Die Silika-Membrantechnologie beseitigt die Probleme und Schwierigkeiten, die mit losen Harzen und Suspensionen verbunden sind.

Gel-Ladefarbstoff

Der mitgelieferte Gel-Ladefarbstoff ermöglicht eine schnellere und bequemere Verarbeitung und Analyse der Proben. Der GelPilot Loading Dye enthält drei Farbstoffe zur Nachverfolgung (Xylencyanol, Bromphenolblau und Orange G), um die Optimierung der Agarosegel-Laufzeit zu erleichtern und zu verhindern, dass kleinere DNA-Fragmente zu weit migrieren (siehe Abbildung „ GelPilot Loading Dye“).

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GelPilot Loading Dye

Verfahren

Das MinElute System nutzt ein einfaches Verfahren mit den Schritten „Binden-Waschen-Eluieren“. Der Bindepuffer wird direkt zur PCR-Probe oder einer anderen enzymatischen Reaktion hinzugefügt, und die Mischung wird auf die MinElute Spin Column aufgetragen. Zur einfachen Bestimmung des optimalen pH-Werts für die DNA-Bindung enthält der Bindepuffer einen pH-Indikator (siehe Abbildung „pH-Indikatorfarbstoff“). Die Nukleinsäuren werden unter den Hochsalzbedingungen des Puffers an die Silikamembran adsorbiert. Verunreinigungen werden durch Waschen entfernt, und die reine DNA wird in einem kleinen Volumen des mitgelieferten Niedrigsalzpuffers oder mit Wasser eluiert und kann direkt für nachfolgende Anwendungen verwendet werden.

Handhabung

MinElute Spin Columns sind so konzipiert, dass sie zwei praktische Handhabungsoptionen bieten (siehe Flussdiagramm „MinElute-Verfahren“). Die Spin-Säulen passen in eine herkömmliche Tisch-Mikrozentrifuge oder auf jeden Vakuumverteiler mit Luer-Anschlüssen, beispielsweise QIAvac 24 Plus, und können außerdem auf dem QIAcube Connect vollständig automatisiert werden (siehe Abbildungen „Handhabungsoptionen für Spin-Säulen A und B“ und „ QIAcube Connect“).

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pH-Indikatorfarbstoff

Handhabungsoptionen für Spin-Säulen – A.

Handhabungsoptionen für Spin-Säulen – B

QIAcube Connect.

Anwendungen

Die mit dem MinElute System aufgereinigten DNA-Fragmente lassen sich direkt für alle Anwendungen verwenden, darunter:

Sequenzierung, einschließlich Next-Generation Sequencing
Microarray-Analyse
Ligation und Transformation
Restriktionsverdau
Markierung

Ergänzende Daten und Abbildungen

Effiziente Primerentfernung

Analyse der PCR-Produkte vor (b) und nach (a) der Aufreinigung mit dem MinElute PCR Purification Kit. Die Proben wurden auf einem 1,2%igen TAE-Agarosegel analysiert. M: Marker.

Specifications

Features	Specifications
Binding capacity	5 µg
Sample type: applications	DNA, Oligonukleotide: PCR-Reaktionen
Elution volume	10 µl
Fragment size	70 bp – 4 kb
Recovery: oligonucleotides dsDNA	Rückgewinnung: Oligonukleotide, dsDNA
Format	Röhrchen
Technology	Silika-Technologie
Processing	Manual
Removal <10mers 17–40mers dye terminator proteins	Entfernung von < 40meren

Ressourcen

Publications

Factors involved in root formation in Medicago truncatula.

Imin N; Nizamidin M; Wu T; Rolfe BG;

J Exp Bot; 2006; 58 (3):439-51 2006 Dec 6 PMID:17158109

Expression of c-kit in human osteosarcoma and its relevance as a prognostic marker.

Sulzbacher I; Birner P; Toma C; Wick N; Mazal PR;

J Clin Pathol; 2006; 60 (7):804-7 2006 Oct 3 PMID:17018686

Application of microdroplet PCR for large-scale targeted bisulfite sequencing.

Komori HK; LaMere SA; Torkamani A; Hart GT; Kotsopoulos S; Warner J; Samuels ML; Olson J; Head SR; Ordoukhanian P; Lee PL; Link DR; Salomon DR;

Genome Res; 2011; 21 (10):1738-45 2011 Jul 14 PMID:21757609

A new fractionation assay, based on the size of formaldehyde-crosslinked, mildly sheared chromatin, delineates the chromatin structure at promoter regions.

Ishihara S; Varma R; Schwartz RH;

Nucleic Acids Res; 2010; 38 (11):e124 2010 Apr 5 PMID:20371521

Transcriptional organization, regulation and role of the Porphyromonas gingivalis W83 hmu haemin-uptake locus.

Lewis JP; Plata K; Yu F; Rosato A; Anaya C;

Microbiology (Reading); 2006; 152 (Pt 11):3367-3382 2006 Nov PMID:17074906

FAQ

The MinElute spin columns included in the following kits should be stored at 2–8°C upon arrival: AllPrep DNA/RNA Micro, EpiTect Fast DNA Bisulfite, EpiTect Fast FFPE Bisulfite, EpiTect Fast LyseAll Bisulfite, EpiTect Plus DNA Bisulfite, EpiTect Plus FFPE Bisulfite, EpiTect Plus LyseAll Bisulfite, exoRNeasy Serum/plasma Maxi, exoRNeasy Serum/Plasma Midi, GeneRead DNA FFPE, GeneRead rRNA Depletion, GeneRead Size Selection, MinElute Gel Extraction, MinElute PCR Purification, MinElute Reaction Cleanup, miRNeasy FFPE, miRNeasy Micro, miRNeasy Serum/Plasma, QIAamp DNA FFPE, QIAamp DNA Investigator, QIAamp DNA Micro, QIAamp MinElute Media, QIAamp MinElute Virus Spin, QIAamp MinElute Virus Vacuum, RNeasy FFPE, RNeasy Micro, RNeasy Plus Micro.

Short-term storage (up to 4 weeks) at room temperature (15–25°C) does not affect the performance. However, for optimal performance and quality, storage temperature should not exceed 25°C.

FAQ ID - 3560

CoralLoad dyes supplied in PCR Kits such as, e.g., Taq, HotStarTaq, and TopTaq DNA Polymerase and TopTaq Master Mix do not interfere with most downstream enzymatic applications.

However, for reproducible results, purification of PCR products using the QIAquick or MinElute PCR Purification Kits prior to enzymatic manipulation is recommended.

FAQ ID -1745

Buffer PB contains a high concentration of guanidine hydrochloride and isopropanol. The exact composition of Buffer PB is confidential. However, this buffer can be purchased separately: Buffer PB.

FAQ ID -2791

No - mineral oil will not affect the clean-up procedure with the QIAquick or MinElute PCR Purification Kit.

FAQ ID -575

Yes, and therefore they are interchangeable.

FAQ ID -581

DNA fragments purified with the QIAGEN DNA Cleanup Systems, i.e., the QIAquick PCR Purification Kit, the MinElute Reaction Cleanup Kit, the QIAEX II Gel Extraction Kit etc. may float out of the loading wells of agarose gels due to residual ethanol carried over from the wash step with Buffer PE (despite the addtition of glycerol-containing loading buffer).

Use either of the following options to remove residual ethanol from the eluate:

re-purify the sample using a QIAquick-, or MinElute column, or QIAEX II resin
incubate the eluate at 56°C for 10 min to evaporate the ethanol
dry down the sample in a vacuum centrifuge, and resuspend the pellet in a small volume of sterile water

FAQ ID -205

As a rule of thumb, single-stranded DNA binds to silica with approximately half the affinity of a double-stranded DNA fragment of the same length under the buffer conditions used in the QIAquick and MinElute Kits. Even though no systematic experimental data exists, we expect that recovery of ssDNA fragments of approximately 200 nucleotides and below will not be very efficient after cleanup using the QIAquick PCR Purification Kit or MinElute PCR Purification Kit. By comparison, it should be possible to purify fragments longer than 140 nucleotides using the QIAquick Gel Extraction Kit.

Note that recovery of single strand DNA is influenced to some degree also by factors such as base composition and secondary structure. It has to be determined empirically by the researcher if cleanup of single-stranded DNA with QIAquick columns yields satisfactory results.

FAQ ID -759

The composition of Buffer EB is:

10 mM Tris-Cl, pH 8.5

Buffer EB is the elution buffer used in the QIAquick PCR, Gel Extraction, Nucleotide Removal Kits, and MinElute Kits for DNA cleanup, and the QIAprep Miniprep Kits for small-scale plasmid purification. The purified DNA can also be eluted in TE (10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA, pH 8.0), but the EDTA may inhibit subsequent enzymatic reactions.

FAQ ID -199

Yes, please follow the User-developed protocol 'Forensic post-PCR purification protocol using the MinElute PCR Purification Kit' (ME01).

FAQ ID -1761

Occasionally, DNA fragments eluted from the silica matrix of QIAquick, MinElute or QIAEX II Kits will contain denatured single-stranded DNA (ssDNA), appearing as a smaller band on an analytical gel. Under certain conditions, chaotropic agents (present in all silica-based DNA purification methods) can denature DNA fragments. This is a rare event that may be influenced by sequence characteristics such as the presence of inverted repeats or A–T-rich stretches.

Because salt and buffering agents promote renaturation of DNA strands, the following tips are recommended:

use the eluted DNA to prepare your downstream enzymatic reaction, but omit the enzyme. Incubate the reaction mix at 95°C for 2 minutes to reanneal the ssDNA, and allow the tube to cool slowly to room temperature before adding the enzyme and proceeding
alternatively, the DNA can be eluted from the silica-gel membrane or resin in 10 mM Tris buffer containing 10 mM NaCl. However, the salt concentration of the eluate must then be taken into consideration in downstream applications.

FAQ ID -148

The QIAquick Spin Columns (100) (cat. no. 28115) in the QIAquick PCR Purification, Gel Extraction, Nucleotide Removal and PCR & Gel Cleanup kits are also sold separately from the kits.

The MinElute columns in the MinElute PCR Purification, Gel Extraction and Reaction Cleanup kits are not sold separately.

We always provide extra buffers in our kits so you can scale up reactions, add extra washes or allow for spillage.

FAQ ID -2460