Ligationsrechner

Dieses Tool bestimmt die erforderliche Insert-Masse für verschiedene molare Insert:Vektor-Verhältnisse innerhalb des für typische Ligationsreaktionen geeigneten Bereichs.

icon_0330_cc_gen_calculator-s Zielsequenz berechnenGeben Sie die Daten der interessierenden Zielsequenzen ein, um Sequenzierungsberechnungen zu erhalten
Einblicke

 

Erforderliche Insert-DNA-Masse [g] = Vektor-DNA-Masse [g] x {Insert-DNA-Länge / Vektor-DNA-Länge} x gewünschtes molares Verhältnis Insert zu Vektor

Hinweise: Das gewünschte Verhältnis ist eines aus dem Set {1, 2, 3, 5 ,7}

Die Insertlänge sollte geringer sein als die Vektorlänge

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Zunächst werden Insert- und Vektor-DNA mit Restriktionsendonukleasen verdaut, um DNA-Fragmente mit klebrigen (oder stumpfen) Enden zu erzeugen. Anschließend werden die gewünschten DNA-Fragmente isoliert und danach durch Behandlung mit DNA-Ligase zusammengefügt. Zum Schluss wird der resultierende intakte Vektor in kompetente E. coli-Zellen transformiert, und die Transformanten werden anhand geeigneter genetischer Auswahlmethoden identifiziert. 

 

Möchten Sie mehr über den Schritt-für-Schritt-Prozess der DNA-Ligation und ihre typische Reaktion erfahren? Erfahren Sie mehr.

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CAT NO./ID P7060L
Klenow Fragment (2500 U)
2500 U of Klenow Fragment (0.5 mL at 5000 U/mL) and 10x Blue Buffer (1 x 1.5 mL)
Saltonase (5000 U)
CAT NO./ID EN32-050
Saltonase (5000 U)
20 µL x 250 U/µL. Storage temperature: -20°C without a defrost cycle; -80°C for long storage. Stable at -20°C for at least 24 months. No loss in activity was observed after 8 weeks of incubation at 37°C.
End-Repair Mix (low concentration)
CAT NO./ID Y9140-LC-L
End-Repair Mix (low concentration)
For 200 low-concentration DNA reactions. End-Repair Mix 1X (0.20 mL), 10X End-Repair Buffer (1 x 1.5 mL) and 1 mM dNTP solution (0.5 mL).
AllTaq PCR Core Kit (250 U)
CAT NO./ID 203123
AllTaq PCR Core Kit (250 U)
50 µl AllTaq Polymerase (5 U/µl), 1.2 ml AllTaq PCR Buffer (5x), 55 µl dNTP Mix (10 mM each), 200 µl Template Tracer (25x), 50 µl Master Mix Tracer (125x), 2 ml Q-Solution (5x), 1.2 ml MgCl2 (25 mM), 1.9 ml RNase-Free Water
Taq DNA Polymerase (250 U)
CAT NO./ID 201203
Taq DNA Polymerase (250 U)
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RNase A (17,500 U)
CAT NO./ID 19101
RNase A (17,500 U)
2.5 ml (100 mg/ml; 7000 units/ml, solution) Unit definition: That amount of enzyme causing the hydrolysis of RNA at a rate such that k (velocity constant) equals unity (Kunitz units) at 25°C and pH 5.0.
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CAT NO./ID 203203
HotStarTaq DNA Polymerase (250 U)
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Omniscript RT Kit (50)
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Omniscript RT Kit (50)
For 50 reverse-transcription reactions: 200 units Omniscript Reverse Transcriptase, 150 µl 10x Buffer RT, 100 µl dNTP Mix (contains 5 mM each dNTP), 1.1 ml RNase-free water
RNase-Free DNase Set (50)
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RNase-Free DNase Set (50)
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QIAGEN Proteinase K (2 ml)
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QIAGEN Proteinase K (2 ml)
2 ml (>600 mAU/ml, solution)