Certal Residual DNA Detection Kits

• Niedrige Bestimmungsgrenze mit hervorragender Reproduzierbarkeit
• Großer linearer Bereich
• Zuverlässige und präzise interne Kontrolle
• Optimierte Protokolle für eine breite Palette von Real-time-Thermocyclern
• Komplett-Kits, einschließlich interner Kontrolle und Positivkontrolle

Bei der Arbeit mit Biopharmazeutika ist eine Prüfung des finalen therapeutischen Materials unerlässlich, um sicherzustellen, dass es frei von kontaminierenden Substanzen ist, z. B. von Rest-DNA der Wirtszelle. Certal Residual DNA Detection Kits wurden für die sensitive und schnelle Real-time-PCR-Quantifizierung von genomischer Rest-DNA aus der Wirtszelle mit doppelt markierten Hydrolyse-Sonden (auch als TaqMan® bezeichnet) entwickelt. Das Certal CHO Detection Kit enthält Reagenzien für den Nachweis von Rest-DNA aus CHO-Wirtszellen mittels Real-time-PCR im Duplex-Format sowie die Certal Internal Control. Darüber hinaus enthält das Kit die Certal Residual DNA Positive Control, die die Funktionsfähigkeit des PCR-Tests in Abwesenheit eines Signals der DNA der CHO-Wirtszelle verifiziert, sowie 2 Formate des passiven Referenzfarbstoffs ROX in verschiedenen Konzentrationen, die die Verwendung auf praktisch jedem Real-time-Gerät ermöglichen.

Certal Residual DNA Detection Kits ermöglichen einen sensitiven und zuverlässigen Nachweis und eine Quantifizierung von genomischer Rest-DNA (gDNA), die für die Herstellung von sicheren und zuverlässigen Biopharmazeutika unerlässlich ist (siehe Abbildung „ Hoch sensitiver und zuverlässiger Nachweis“). Das Certal CHO Detection Kit ermöglicht den Nachweis von genomischer Rest-DNA aus Ovarienzellen des Chinesischen Zwerghamsters (CHO-Zellen) mit einer niedrigen Nachweisgrenze und über einen großen linearen Bereich. Dabei sind schon kleinste Mengen an genomischer Rest-DNA zuverlässig nachweisbar (siehe Abbildung „ Niedrige Nachweisgrenze“). Certal Residual DNA Detection Kits sind mit einer breiten Palette von Thermocyclern kompatibel und liefern sensitive und zuverlässige Daten (siehe Abbildungen „ Sensitiver und zuverlässiger Nachweis auf einer breiten Palette von Thermocyclern“ und „ Sensitiver und zuverlässiger Nachweis von genomischer CHO-DNA auf dem Rotor-Gene Q“).

Zur Gewährleistung einer hohen Prozesssicherheit enthalten Certal Residual DNA Detection Kits die QIAGEN Internal Control. Diese interne Kontrolle wurde speziell entwickelt, um die korrekte Interpretation negativer Ergebnisse zu ermöglichen, ohne dabei den Zielassay zu stören. Die QIAGEN Internal Control wird bei Co-Amplifikation mit genomischer DNA zuverlässig nachgewiesen (siehe Abbildung „ Zuverlässiger Nachweis der QIAGEN Internal Control“).

Um sicherzustellen, dass Verunreinigungen aus der Wirtszelllinie, die zur Herstellung von Biopharmazeutika verwendet wird, im endgültigen therapeutischen Material nicht mehr vorhanden sind, ermöglichen Certal Residual DNA Detection Kits als vorkonfigurierter Assay den spezifischen Nachweis von DNA aus CHO-Wirtszellen. Jeder Certal Residual DNA Assay besteht aus einem optimierten Primerpaar und einer FAM-markierten Hydrolyse-Sonde für den zuverlässigen Nachweis von genomischer CHO-Rest-DNA. Humane Hintergrund-DNA und Certal Internal Control DNA führen dabei nicht zu einer Störung des Certal Residual DNA Assays.

Der vorgemischte Certal Internal Control Assay enthält einen Forward- und einen Reverse-Primer sowie eine MAX-markierte Hydrolyse-Sonde für den Nachweis von Certal Internal Control DNA. Der Assay wurde speziell optimiert, um Störungen der Certal Residual DNA Assays zu vermeiden. Die Certal Residual DNA Positive Control ermöglicht die korrekte Interpretation negativer Ergebnisse, indem sie die Funktionsfähigkeit der Amplifikationsreaktion selbst testet.

Der Certal ResDNA PCR Buffer wurde optimiert, um sensitive und zuverlässige quantitative Ergebnisse aus der Real-time-PCR im Duplex-Format zu liefern. Der Master-Mix enthält außerdem dUTP, was eine Vorbehandlung mit Uracil-N-Glycosylase (UNG) vor dem Start der PCR ermöglicht. Dadurch soll gewährleistet werden, dass etwaige kontaminierende PCR-Produkte die nachfolgenden PCR-Reaktionen nicht stören.

Certal Residual DNA Detection Kits bieten ein einfaches Verfahren für den Nachweis von Wirtszell-DNA, Certal Internal Control und Certal Residual DNA Positive Control (siehe Abbildung  Verfahren des Certal Residual DNA Detection Kits). Mischen Sie einfach den mitgelieferten Master-Mix mit dem Certal Residual DNA Assay, dem Certal Internal Control Assay und der Certal Internal Control DNA und geben Sie dann Ihre Proben-DNA oder Certal Residual DNA Positive Control hinzu. Das Kit-Handbuch enthält optimierte Protokolle für die Verwendung auf einer Vielzahl unterschiedlicher Thermocycler. ROX wird in 2 Röhrchen mit unterschiedlichen Konzentrationen bereitgestellt, sodass es auf jedem Real-time-Gerät verwendet werden kann (siehe Tabelle „Auswahl der richtigen ROX-Konzentration“).

Certal Residual DNA Detection Kits ermöglichen eine sensitive Real-time-PCR mit sequenzspezifischen Sonden für den Nachweis von Wirtszell-DNA, einschließlich einer internen Kontrolle. Die Kits können auf einer breiten Palette unterschiedlicher Real-time-Thermocycler verwendet werden, darunter Thermocycler von QIAGEN, Applied Biosystems, Bio-Rad, Roche und Agilent.