QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits

• Plasmid-DNA in Transfektionsqualität mit Endotoxingehalt <1 EU/µg DNA
• DNA-Reinheit vergleichbar mit der Anionenaustauschtechnologie
• Hohe Ausbeute (bis zu 50 µg)
• Bequeme Handhabung und einfaches Verfahren
• Vakuum-, Zentrifugations- und automatische Verarbeitungsoptionen

QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits ermöglichen eine innovative Vorgehensweise für Plasmidpräparationen im 96-Well-Format. Die Proben können komfortabel mit dem QIAvac 96 und/oder einer Zentrifuge oder automatisiert mit dem BioRobot Universal System aufbereitet werden. Die proprietäre Bindungschemie ermöglicht die Gewinnung von bis zu 50 µg transfektionsfähiger Plasmid-DNA pro Vertiefung aus bis zu 5 ml einer E.-coli-Kultur. Die Endotoxinspiegel werden durch einen speziellen Puffer zur Endotoxinreduktion auf Werte unter 1 EU/µg DNA gesenkt.
Für optimale Ergebnisse wird empfohlen, dieses Produkt zusammen mit dem QIAvac 96 zu verwenden.

Gleichbleibend hohe Ausbeute an einsatzbereiter Plasmid-DNA

Die QIAGEN Plasmid Plus Technologie zeichnet sich durch die gleiche Leistung und Qualität aus wie die Anionenaustauschtechnologie. Es können hohe Ausbeuten von bis zu 50 µg transfektionsfähiger Plasmid-DNA erzielt werden (siehe Abbildung „ Hohe Ausbeute an Plasmid-DNA“).

Sehr niedrige Endotoxinspiegel

Die Kits enthalten einen Puffer zur Endotoxinreduktion, der bakterielle Endotoxine effektiv auf Spiegel von typischerweise unter 1 EU/µg DNA verringert und eine Plasmid-DNA-Qualität liefert, die sich für die Transfektion sensitiver Zelllinien eignet (siehe Abbildungen „ Sehr geringe Endotoxinspiegel“ und „ Hocheffiziente Transfektion in eine sensitive Zelllinie“).

Die QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits basieren auf der QIAGEN Plasmid Plus Technologie, einem einmaligen Verfahren zur Plasmidpräparation. Das Verfahren basiert auf einer nichtchaotropen Bindungschemie, die eine mit Anionenaustauschpräparationen vergleichbare Selektivität und DNA-Qualität gewährleistet. Nach der Lysatreinigung wird durch ein einfaches Binden-Waschen-Eluieren-Verfahren hochkonzentrierte Plasmid-DNA gewonnen, die direkt in nachfolgenden Anwendungen eingesetzt werden kann. Die einzigartige Kit-Chemie und der Aufbau der Plasmid Plus 96-Platten ermöglichen hohe Bindungskapazitäten.

Dieses einzigartige Verfahren zur Plasmidpräparation im 96-Well-Format liefert hochreine transfektionsfähige Plasmid-DNA in einem einfachen Bind-Wash-Eluieren-Verfahren (siehe Flussdiagramm „ QIAGEN PlasmidPlus 96 Verfahren“).

Das QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep-Protokoll beginnt mit einem modifizierten alkalischen Lyseverfahren. Nach der Neutralisierung werden die Lysate mit einer TurboFilter 96-Platte bereinigt. Zur Optimierung der Plasmid-DNA-Bindung an die Membran der Plasmid Plus 96-Platte wird dem bereinigten Lysat ein nichtchaotroper Bindungspuffer zugesetzt. Der einmalige Bindungspuffer bietet sehr spezifische Bindungsbedingungen, die zu einer mit Anionenaustauschpräparationen vergleichbaren DNA-Qualität führen. Ein Waschschritt mit einem Puffer zur Endotoxinreduktion führt zu transfektionsfähiger Plasmid-DNA, die sich für die Transfektion der meisten Zelllinien eignet (siehe Abbildung „ Hocheffiziente Transfektion einer sensitiven Zelllinie“). Die proprietäre Bindungschemie ermöglicht die Aufreinigung von bis zu 50 µg Plasmid-DNA pro Vertiefung aus einer E.-coli-Kultur von 5 ml (siehe Abbildung „ Hohe Ausbeute an Plasmid-DNA“).

Komfortable und flexible Handhabungsoptionen

Mit dem QIAGEN Plasmid Plus 96 BioRobot Kit auf dem BioRobot Universal System kann das Verfahren vollständig automatisiert werden. Wahlweise wird QIAvac 96 für die Lysatbereinigung mit der TurboFilter 96 Platte verwendet, und die DNA-Bindungs- und Waschschritte erfolgen mit der Plasmid Plus 96-Platte. Die Trocknungs- und Elutionsschritte können entweder mit QIAvac 96 oder mit einer kompatiblen Zentrifuge durchgeführt werden. Darüber hinaus lässt sich das gesamte Verfahren mit einer kompatiblen Zentrifuge abwickeln.

Die mit den QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits aufgereinigte Plasmid-DNA eignet sich hervorragend für eine Vielzahl von Anwendungen, darunter:

• Transfektion, auch in sensitive Zelllinien
• Präparation von Short-Hairpin-Vektoren (sh-Vektoren)
• Enzymatische Modifikationen
• Klonierung
• Restriktionsaufschluss