QuantiFast Pathogen +IC Kits
Für sensitiven und zuverlässigen Nachweis von viraler RNA/DNA und bakterieller DNA, einschließlich interner Kontrolle
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Cat. No. / ID: 211454
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QuantiFast Pathogen +IC Kits sind für den sensitiven und schnellen Real-time-PCR- oder Ein-Schritt-RT-PCR-Nachweis von pathogenen Nukleinsäuren mit sequenzspezifischen Sonden ausgelegt. Um eine hohe Prozesssicherheit durch die korrekte Interpretation negativer Ergebnisse zu ermöglichen, enthält jedes Kit Reagenzien für den Real-time-Nachweis im Multiplex-Format von bis zu 4 benutzerdefinierten pathogenen Zielen (z. B. Viren, Bakterien, Pilze usw.) sowie der internen Kontrolle (IC). Das Kit ist in zwei Formaten erhältlich: Das QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit für den Nachweis viraler RNA, das ein internes RNA-Kontroll-Template sowie das Internal Control Primer/Sonden-Set enthält, oder das QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit für den Nachweis viraler, bakterieller oder fungaler DNA, das ein internes DNA-Kontroll-Template sowie das Internal Control Primer/Sonden-Set enthält. Bei beiden Kits wird ROX in 2 Röhrchen mit unterschiedlichen Konzentrationen bereitgestellt, sodass die Kits auf praktisch jedem Real-time-Gerät verwendet werden können. Der Master-Mix kann bequem bei 2–8 °C gelagert werden.
QuantiFast Pathogen +IC Kits ermöglichen den gleichzeitigen Nachweis von viralen RNA- oder DNA-Zielen sowie der mitgelieferten internen Kontrolle über einen breiten linearen Bereich, ohne dabei Einbußen bei der Sensitivität beim Multiplexing in Kauf nehmen zu müssen (siehe Abbildungen „ Sensitiver Nachweis des Norovirus auf dem Rotor-Gene Q“ und „ Hohe Linearität und Präzision beim Singleplex- und Duplex-Nachweis“). Das Protokoll wurde entwickelt, um schnelle Zyklusexperimente auf den meisten Thermocyclern mit hoher Zuverlässigkeit durchzuführen (siehe Abbildungen „ Sensitiver Nachweis von BHV-1 auf dem Rotor-Gene Q“ und „ Sensitiver Nachweis von BHV-1 auf dem ABI 7500“). Die kombinierte Amplifikation des pathogenen Ziels und der internen Kontrolle mit den QuantiFast Pathogen +IC Kits erhöht die Prozesssicherheit des Workflows zum Nachweis von Erregern, da die korrekte Interpretation negativer Ergebnisse gewährleistet ist (siehe Abbildung „ Korrekte Interpretation negativer Ergebnisse“).
Der in den Kits enthaltene QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer stabilisiert die RNA- und DNA-Standards während der Verdünnung und Reaktionseinrichtung und verhindert den Verlust von Nukleinsäuren an Kunststoffoberflächen, wie z. B. Röhrchen oder Pipettenspitzen. Er ermöglicht eine zuverlässige Verdünnung von Standards, die zur Quantifizierung viraler Nukleinsäuren verwendet werden, und zeichnet sich durch einen breiten linearen Bereich aus, der von niedrigen bis zu hohen CT-Werten reicht. Der Puffer sorgt für eine längere Lagerung der Standards ohne Zersetzung (siehe Abbildung „ Zuverlässige Verdünnung und Lagerung von RNA-Standards“).
Um eine hohe Prozesssicherheit durch die korrekte Interpretation negativer Ergebnisse zu ermöglichen, enthält jedes QuantiFast Pathogen +IC Kit Reagenzien für den Real-time-Nachweis im Multiplex-Format von benutzerdefinierten pathogenen Zielen mit der internen Kontrolle. Die Amplifikation von Kontroll- und Zielgenen in derselben Reaktion statt in getrennten Reaktionen erhöht die Zuverlässigkeit der Genquantifizierung, indem Handhabungsfehler auf ein Minimum reduziert werden.
Die QuantiFast Pathogen +IC Kits ermöglichen schon beim ersten Versuch einen sensitiven und schnellen Nachweis von pathogenen Nukleinsäuren mittels Real-time-PCR im Multiplex-Format oder Ein-Schritt-RT-PCR (siehe Flussdiagramm „ QIAGEN Multiplex-Kits“). Der optimierte Master-Mix sorgt dafür, dass die PCR-Produkte in einer Multiplex-Reaktion mit der gleichen Effizienz und Sensitivität amplifiziert werden wie die PCR-Produkte in einer entsprechenden Singleplex-Amplifikationsreaktion. Der speziell entwickelte schnelle PCR-Puffer enthält das neuartige Additiv Q-Bond, das die für die Denaturierung, Hybridisierung und Extension benötigte Zeit erheblich verkürzt (siehe Abbildung „ Schnelle Primerhybridisierung“). Eine ausgewogene Kombination aus K+- und NH4+-Ionen sowie ein einzigartiger synthetischer Faktor MP sorgen für eine stabile und effiziente Hybridisierung von Primern und Sonden an das Nukleinsäure-Template und ermöglichen so eine hohe PCR-Effizienz (siehe Abbildung „ Einzigartiger PCR-Puffer“). Darüber hinaus sorgt die einzigartige Formulierung der Sensiscript Reverse Transcriptase für eine hoch sensitive reverse Transkription viraler RNA, während die HotStarTaq Plus DNA Polymerase einen effizienten Hot-Start gewährleistet und die Bildung unspezifischer Produkte verhindert.
Kit-Komponente | Eigenschaften | Vorteile | |
---|---|---|---|
5x QuantiFast Pathogen PCR Master Mix | Konzentrierter Master-Mix | Hochkonzentriert und optimiert für den sensitiven Nachweis von Krankheitserregern | Zur Erhöhung der Sensitivität können dem Assay größere Volumen an Template zugegeben werden |
HotStarTaq Plus DNA Polymerase | Aktivierung binnen 5 Minuten bei 95 °C | Einrichtung der qPCR-Reaktionen bei Raumtemperatur | |
QuantiFast Pathogen Buffer | Ausgewogene Kombination von NH4+- und K+-Ionen | Spezifische Primerhybridisierung sorgt für zuverlässige PCR-Ergebnisse | |
Synthetischer Faktor MP | Zuverlässige Multiplex-Analyse von bis zu 4 Genen in demselben Röhrchen | ||
Einzigartiges Q-Bond-Additiv | Kürzere PCR-Laufzeiten, die schnellere Ergebnisse und mehr Reaktionen pro Tag ermöglichen | ||
Internal Control Assay | Internes Kontroll-Template | Internes Kontroll-DNA-Template im QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit | Eine universelle DNA-Amplifikationskontrolle, die in Assays für unterschiedliche Krankheitserreger verwendet werden kann |
Interne Kontroll-RNA im QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit | Eine universelle RNA-Amplifikationskontrolle, die in Assays für unterschiedliche Krankheitserreger verwendet werden kann | ||
Internal Control Assay | Vorgemischtes Primer-/Sonden-Set (TaqMan®-Sonde) mit MAX-Markierung (entspricht HEX, VIC usw.) | Keine Störung von Primern gegen das pathogene Ziel | |
Zusätzliche Kit-Komponenten | QuantiFast Pathogen RT Mix* | Enthält eine einzigartige Formulierung der Sensiscript Reverse Transcriptase | Optimiert für den hoch sensitiven Nachweis von pathogener RNA |
ROX Dye Solution | Separates Röhrchen mit passivem Referenzfarbstoff zur Normalisierung von Fluoreszenzsignalen auf Applied Biosystems 7500 Real-time-PCR-Systemen. Optional: Kann auf Stratagene-Geräten von Agilent verwendet werden | Präzise Quantifizierung auf Thermocyclern, die ROX-Farbstoff benötigen. Keine Störung der PCR auf einem beliebigen Real-time-Thermocycler | |
High-ROX Dye Solution | Separates Röhrchen mit passivem Referenzfarbstoff zur Normalisierung von Fluoreszenzsignalen auf Applied Biosystems 7900- und StepOne-Real-time-PCR-Systemen | ||
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer | Proprietäre Pufferformulierung für die Verdünnung und Lagerung von Nukleinsäurestandards | Stabilisiert RNA- und DNA-Standards während der Verdünnung und Reaktionseinrichtung und verhindert den Verlust von Nukleinsäuren an Kunststoffoberflächen, wie z. B. Röhrchen oder Pipettenspitzen |
QuantiFast Pathogen +IC Kits bieten ein einfaches Verfahren für den Nachweis eines benutzerdefinierten Erregers und der internen Kontrolle. Sie enthalten einen gebrauchsfertigen Master-Mix für den Real-time-Nachweis von viraler RNA (Ein-Schritt-RT-PCR) oder viraler, bakterieller und fungaler DNA (PCR). Eine Optimierung der Reaktions- und Zyklusbedingungen ist nicht erforderlich. Mischen Sie einfach den mitgelieferten Master-Mix mit dem Pathogen-Assay (Primer und Sonde) und dem mitgelieferten Internal Control Assay und der Internal Control DNA oder RNA. Wenn die interne Kontrolle im Rahmen der Probenaufreinigung zugegeben wurden, fügen Sie dem Reaktionsgemisch statt der Internal Control DNA oder RNA RNase-freies Wasser zu. Geben Sie dann Ihre DNA- oder RNA-Probe zu, und starten Sie die Reaktion auf einem beliebigen Thermocycler. Das Kit-Handbuch enthält optimierte Protokolle für die Verwendung mit TaqMan®-Sonden auf einer Vielzahl unterschiedlicher Thermocycler. Außerdem enthält es Empfehlungen für die Auswahl von Farbstoffkombinationen.
Jedes QuantiFast Pathogen +IC Kit enthält den Internal Control Assay und Internal Control DNA oder RNA zur Verwendung als Amplifikationskontrolle, die direkt zum Reaktionsgemisch zugegeben wird. Die interne Kontrolle kann auch zum Aufreinigungsverfahren zugegeben werden, um sowohl den Aufreinigungsprozess als auch die Amplifikation zu kontrollieren. Für die Zugabe der internen Kontrolle zur Aufreinigung können Sie separat hochkonzentrierte Internal Control DNA oder RNA (Hohe Konz.) bestellen (siehe Abbildung „ QIAGEN Internal Control“).
QuantiFast Pathogen +IC Kits bieten eine sensitive Real-time-PCR oder eine Ein-Schritt-RT-PCR mit sequenzspezifischen Sonden für den Nachweis von pathogener DNA und/oder RNA, einschließlich einer internen Kontrolle. Die Kits können auf einer breiten Palette unterschiedlicher Real-time-Thermocycler verwendet werden, darunter Thermocycler von QIAGEN, Applied Biosystems, Bio-Rad, Roche (außer Kapillar-Thermocycler) und Agilent.
Features | Specifications |
---|---|
Applications | Nachweis von Krankheitserregern: Real-time-PCR für virale, bakterielle oder fungale DNA (QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit) oder Ein-Schritt-RT-PCR für den Nachweis von viraler RNA (QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit) |
Sample/target type | QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit: virale, bakterielle oder fungale DNA; QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit: virale RNA |
Single or multiplex | Duplex |
Reaction type | Real-time-PCR oder Ein-Schritt-RT-PCR, einschließlich einer internen Kontrolle (IC) |
Real-time or endpoint | Real time |
SYBR Green I or sequence-specific probes | Sequenzspezifische Sonden |
Thermal cycler | Für die meisten standardmäßigen und schnellen Real-time-Thermocycler, die mit Duplex-PCR/RT-PCR kompatibel sind, z. B. Rotor-Gene Q oder Thermocycler von Agilent, Applied Biosystems, BioRad, Roche |
With or without ROX | Der Master-Mix wird ohne ROX-Farbstoff ausgeliefert, aber es sind 2 separate ROX-Lösungen enthalten: High-ROX Dye Solution zur Verwendung mit ABI Thermocyclern außer ABI 7500, ROX Dye Solution (niedrige ROX-Konz.) zur Verwendung mit ABI 7500 und den Thermocyclern anderer Hersteller |