QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays

Für die Vektorgenomtitration mit überlegener Genauigkeit, Reproduzierbarkeit und Geschwindigkeit auf dem QIAcuity Digital PCR System

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dPCR CGT Assay GFP (FAM)

Cat. No. / ID:  250236

Für 500 12 µl-Reaktionen (20x): QIAGEN Cell and Gene Therapy Assay für GFP zur Verwendung mit dem QIAcuity dPCR System.
1.140,00 €
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Assay
GFP
ITR2/5
bGH polyA
WPRE
SV40 promoter
SV40 polyA
CMV promoter
hGH polyA
CMV enhancer
AMP resistance
Dye
FAM
HEX
Cy5
dPCR CGT Assay GFP (FAM) ist für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Dieses Produkt ist nicht für die Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Krankheit bestimmt.

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Eigenschaften

  • Ein breites Angebot aus zehn verschiedenen im Labor validierten dPCR-CGT-Assays
  • Assays mit verschiedenen Fluorophoroptionen erlauben die Multiplexierung, um mehr Informationen aus einer Probe zu gewinnen
  • Ein einfacher und schneller Workflow, vergleichbar mit der qPCR

Angaben zum Produkt

Das Adeno-assoziierte Virus (AAV) ist ein häufig bei Gentherapieanwendungen eingesetzter viraler Vektor. Generierung und Aufreinigung der viralen Vektoren erfordern jedoch eine strikte Qualitätskontrolle, um eine sichere und zuverlässige Dosierung im Rahmen klinischer Studien oder der Patientenversorgung zu gewährleisten. Die Möglichkeit zur genauen Quantifizierung von Vektortitern und zum Nachweis von Kontaminationen ist für sichere und wirksame AAV-basierte Gentherapien von zentraler Bedeutung.

Leistung

Die QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays sind ein breites Angebot aus zehn verschiedenen im Nasslabor validierten dPCR-CGT-Assays, die mit verschiedenen Fluorophoren erhältlich sind und so eine überlegene Genauigkeit und Reproduzierbarkeit und einen dynamischen Bereich über mindestens 4 Größenordnungen bei schneller Messung von Virustitern in einem Multiplex-Setup ermöglichen. Die Assays werden zusammen mit QIAcuity Digital PCR System, QIAcuity Probe PCR Kit und QIAcuity Nanoplates verwendet und bieten einen lückenlosen dPCR-Workflow, der mit der qPCR vergleichbar ist, aber eine absolute Quantifizierung der AAV-Vektorgenomkopien in Ihrer Probe ermöglicht. Die Assays wurden unter Berücksichtigung der Anforderungen an die biopharmazeutische Herstellung und QK entwickelt.

Prinzip

Das Prinzip der dPCR-Reaktion in den Nanoplatten finden Sie hier beschrieben.

Spezielle CGT-Assays ermöglichen die AAV-Quantifizierung auf dem QIAcuity. Diese Assays sind validiert und können in Einzelplex- und Multiplex-Reaktionen verwendet sowie zusätzlich mit Zielgen-Assays kombiniert werden für:

  • genaue Quantifizierung bis 0,3 Kopien/µl
  • hohe Präzision über einen breiten dynamischen Bereich
  • hohe Genauigkeit über Assays (unabhängig vom Fluorophor) und Bediener hinweg
  • hohe Präzision (< 10 % Abweichung vom Mittelwert) unabhängig von Fluorophoren und Bedienern
  • Kompatibilität mit sowohl dPCR- als auch qPCR-Messung

Verfahren

Die QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays werden in Form einer mit verschiedenen Fluorophoroptionen erhältlichen, gebrauchsfertigen 20x Primer-Sonden-Mischung geliefert und sind zur Verwendung mit dem QIAcuity Probe PCR Kit optimiert. Diese Assays ermöglichen sowohl Einzelplex- als auch Multiplex-CGT-Anwendungen, einschließlich absolute Quantifizierung des Vektortiters und Assay-Robustheit.

Anwendungen

Die QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays werden für verschiedene Anwendungen verwendet, darunter Virustitermessungen, die Messung der Vektorgenomintegrität und die Bestimmung potenzieller Plasmidkontaminationen bei Verwendung von Amp-Plasmiden für die Produktion von AAVs. Die Integration dieser dPCR CGT-Assays in den Qualitätskontrollprozess bei der Entwicklung von Gentherapien bedeutet eine größere Gewissheit, dass sichere und wirksame Behandlungen erhalten werden.

Ergänzende Daten und Abbildungen

Ressourcen

Quick-Start Protocols (1)
Application Notes (2)
The QIAcuity dPCR System, complemented by the QIAcuity Software Suite version 2.5 and higher, offers a powerful solution for determining DNA integrity and stability. Analyzing up to 5 targets simultaneously enables accurate and precise integrity assessment. The importance of determining genome integrity becomes particularly evident in analyzing viral vectors such as AAVs, which are known for their susceptibility to packaging errors. Moreover, dPCR is a valuable tool for assessing DNA stability, providing valuable insights into storage and processing impacts.
The QIAcuity dPCR System, complemented by the QIAcuity Software Suite version 2.5 and higher, offers a powerful solution for determining DNA integrity and stability. Analyzing up to 5 targets simultaneously enables accurate and precise integrity assessment. The importance of determining genome integrity becomes particularly evident in analyzing viral vectors such as AAVs, which are known for their susceptibility to packaging errors. Moreover, dPCR is a valuable tool for assessing DNA stability, providing valuable insights into storage and processing impacts.
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

Do I need to use restriction enzymes when quantifying AAV genomes?

In some cases, it is recommended to perform a digest with compatible restriction enzymes. For example, when quantifying ITRs, the strong secondary structure of the terminal repeats might affect titration. Compatible restriction enzymes are indicated in the corresponding data sheets of the CGT dPCR assays.

FAQ ID - 3866
How can I resuspend the lyophilized assay?

Please resuspend the lyophilized assays in 330 µl TE buffer to obtain a 20× stock. Additional information can be found in the QSP and the data sheets.

FAQ ID - 3864
Do you have any recommendations on how to process my AAV samples?

To ensure consistent and reproducible measurements of viral titers, we recommend the CGT Viral Vector Lysis Kit (cat. no. 250272/250273). It has been optimized to work in conjuction with the QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays and the QIAcuity Probe PCR Kit on the QIAcuity instruments as part of a standardized and complete viral vector titer workflow.

FAQ ID - 3860
Are the assays also compatible with qPCR?

Yes. The assays can also be used for vector genome titration in a qPCR.

FAQ ID - 3871
Can I use the CGT dPCR assays for the titer determination of RNA viruses?

Yes, you can. cDNA would be used in this case for quantification.

FAQ ID - 3869
In which channels can you detect the CGT dPCR assays?

Most of the assays are offered with a FAM, HEX, or Cy5 fluorophore, and can be detected in the Green, Yellow, or Crimson channel, respectively. SV40 poly A, hGH poly A, and Amp resistance assays are only available with a FAM or HEX fluorophore.

FAQ ID - 3863
How do I know if the assays are compatible with the sample DNA of interest?

An extended sequence context for each assay is provided in the corresponding data sheet. 

FAQ ID - 3870
Can they be used with lentiviral vectors?

Yes. The assays can also be used with lentiviral vectors. However, lentiviral vectors have an RNA genome. cDNA synthesis is crucial before performing the PCR for titer quantification.

FAQ ID - 3872
What quenchers are used?

The probes are double quenched with ZEN/TAO and IOWA black quenchers.

FAQ ID - 3865
Can I combine your CGT dPCR assays with custom designed assays?

Yes, the CGT dPCR assays can be used in singleplex and multiplex reactions. Custom designed assays can be added into a multiplex reaction according to customer needs.

FAQ ID - 3861
Can the CGT dPCR assays also be used for the analysis of AAV genome integrity?

Yes. When multiplexing different targets, it is possible to get additional information on genome integrity using the “Multiple occupancy” analysis in the QIAcuity Software Suite.

FAQ ID - 3867
Can the CGT dPCR assays also be used for the quantification of non-AAV samples?

Yes. They can be used as long as the assays match the region of interest.

FAQ ID - 3868
How many assays can be multiplexed?

Two to five assays can be combined into a multiplex reaction depending on the QIAcuity Digital PCR platform, hence the 2-plex or 5-plex instruments.

FAQ ID - 3862