QIAquick 96 PCR Purification Kits – zur Aufreinigung von PCR-Produkten

Zur Aufreinigung von 96 PCR-Produkten (bis zu 10 µg), 100 bp bis 10 kb

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QIAquick 96 PCR Purification Kit (4)

Cat. No. / ID:   28181

Für die Aufreinigung von 4 × 96 PCR-Reaktionen: 4 QIAquick 96 Plates, Puffer, Collection Microtubes (1,2 ml), Verschlusskappen
Kit
QIAquick 96 PCR Purification Kit
QIAquick 96 PCR BioRobot Kit
Präparationen
4
24
QIAquick 96 PCR Purification Kits sind für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Diese Produkte sind nicht zur Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Erkrankung vorgesehen.

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Eigenschaften

  • Rückgewinnung von gebrauchsfertiger DNA von bis zu 95 %
  • Schnelles und praktisches Verfahren
  • Reinigung von DNA von bis zu 10 kb Länge in drei einfachen Schritten

Angaben zum Produkt

QIAquick 96 PCR Purification Kits enthalten 96-Well-Platten, Puffer und Sammelröhrchen für die Silikamembran-basierte Hochdurchsatzaufreinigung von PCR-Produkten mit einer Größe > 100 bp. DNA mit einer Größe von bis zu 10 kb wird in einem einfachen und schnellen Verfahren („Binden-Waschen-Eluieren“) aufgereinigt und in einem Volumen von 60–80 µl (resultierend in einem Elutionsvolumen von 40–60 µl) eluiert. Das Reinigungsverfahren kann auf der BioRobot Universal Workstation mit dem QIAquick 96 PCR BioRobot Kit vollständig automatisiert werden.

Leistung

Das QIAquick 96 PCR Kit bietet eine schnelle und einfache Aufreinigung von PCR-Proben im Hochdurchsatz mit Rückgewinnungsraten von bis zu 90 %. Das QIAquick 96-Verfahren liefert hochreine DNA, die sich für verschiedene nachgeschaltete Anwendungen eignet (siehe Abbildung „ Genaue Sequenzierung“). Mit dem QIAvac 96 werden DNA-Fragmente von 100 bp bis 10 kb Länge aus 1–4 × 96 Proben aufgereinigt.
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Prinzip

QIAquick 96 Kits enthalten eine Silika-Membraneinheit für die Bindung von DNA in Hochsalzpuffer und die Elution mit Niedrigsalzpuffer oder Wasser. Durch die Aufreinigung werden Primer, Nukleotide, Enzyme, Mineralöl, Salze, Agarose, Ethidiumbromid und andere Verunreinigungen aus DNA-Proben entfernt. Die Silika-Membrantechnologie beseitigt die Probleme und Schwierigkeiten, die mit losen Harzen und Suspensionen verbunden sind. Spezialisierte Bindepuffer sind für spezifische Anwendungen optimiert und fördern die selektive Adsorption von DNA-Molekülen innerhalb bestimmter Größenbereiche.

Das QIAquick 96-Verfahren ermöglicht die parallele Aufreinigung von bis zu 96 PCR-Proben mittels effizienter vakuumgestützter Aufreinigung auf einem QIAvac 96.
Das QIAquick 96 PCR BioRobot Kit ist ein speziell für den Einsatz auf dem BioRobot Universal optimiertes Kitformat. Das Kit enthält QIAquick 96 Module sowie alle Puffer und Plastikmaterialien, die für die automatisierte Hochdurchsatzreinigung von 96 PCR-Proben benötigt werden.

Verfahren

Das QIAquick System nutzt ein einfaches Verfahren mit den Schritten „Binden-Waschen-Eluieren“ (siehe Flussdiagramm „ QIAquick 96-Verfahren“). Der Bindepuffer wird der PCR-Probe oder einer anderen enzymatischen Reaktion direkt zugesetzt und die Mischung wird anschließend auf die 96-Well-Platte aufgetragen. Die Nukleinsäuren werden unter den Hochsalzbedingungen des Puffers an die Silikamembran adsorbiert. Verunreinigungen werden durch Waschen entfernt, und die reine DNA wird in einem kleinen Volumen des mitgelieferten Niedrigsalzpuffers oder mit Wasser eluiert und kann direkt für nachfolgende Anwendungen verwendet werden.

Handhabung

QIAquick Multiwell Module werden mittels vakuumgestützter Aufreinigung auf QIAvac Verteilern verarbeitet. Das QIAquick 96 PCR Purification Kit erfordert den Einsatz des QIAvac 96-Vakuumverteilers. Das Reinigungsverfahren kann auf den BioRobot U Workstations mit dem QIAquick 96 PCR BioRobot Kit vollständig automatisiert werden.

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Anwendungen

Die mit dem MinElute oder QIAquick System aufgereinigten DNA-Fragmente können direkt für zahlreiche Anwendungen genutzt werden, darunter Sequenzierung, Microarray-Analyse, Ligation und Transformation, Restriktionsverdau, Markierung, Mikroinjektion, PCR und In-vitro-Transkription.

Ergänzende Daten und Abbildungen

Specifications

FeaturesSpecifications
Binding capacity10 µg
ProcessingManuell/automatisiert
Removal <10mers 17–40mers dye terminator proteinsEntfernung von < 40meren
Sample type: applicationsDNA, Oligonukleotide: PCR-Reaktionen
Format96-Well-Platte
Fragment size100 bp – 10 kb
TechnologySilika-Technologie
Recovery: oligonucleotides dsDNARückgewinnung: Oligonukleotide, dsDNA
Elution volume60–80 µl

Ressourcen

Quick-Start Protocols (1)
Technical Information and Important Notes (2)
Kit Handbooks (1)
For rapid purification of multiple PCR products 
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

Publications

Temporal and differential gene expression of Singapore grouper iridovirus.
Chen LM; Wang F; Song W; Hew CL;
J Gen Virol; 2006; 87 (Pt 10):2907-2915 2006 Oct PMID:16963749
Comparative genomics of host-specific virulence in Pseudomonas syringae.
Sarkar SF; Gordon JS; Martin GB; Guttman DS;
Genetics; 2006; 174 (2):1041-56 2006 Sep 1 PMID:16951068
cDNA microarrays as a tool for identification of biomineralization proteins in the coccolithophorid Emiliania huxleyi (Haptophyta).
Quinn P; Bowers RM; Zhang X; Wahlund TM; Fanelli MA; Olszova D; Read BA;
Appl Environ Microbiol; 2006; 72 (8):5512-26 2006 Aug PMID:16885305
Characterization of the vernalization response in Lolium perenne by a cDNA microarray approach.
Ciannamea S; Busscher-Lange J; de Folter S; Angenent GC; Immink RG;
Plant Cell Physiol; 2006; 47 (4):481-92 2006 Jan 31 PMID:16449231
Anti-inflammatory activity in vitro and in vivo of the protein farnesyltransferase inhibitor tipifarnib.
Xue X; Lai KT; Huang JF; Gu Y; Karlsson L; Fourie A;
J Pharmacol Exp Ther; 2005; 317 (1):53-60 2005 Dec 13 PMID:16352705

FAQ

I bound an 11 kb DNA fragment to a QIAquick column; is it completely lost?

Larger DNA fragments bind more tightly to the QIAquick columns. It is difficult to predict whether a DNA fragment larger than 10 kb can be efficiently recovered, because this depends on base composition as well as fragment size. If the fragment is only a few kb larger than the 10 kb limit, it can be helpful to heat the elution buffer EB to 60°C and let it incubate on the column for a few minutes before centrifuging. However, please note that it will become less likely to recover your sample the larger the fragment size is. As we cannot guarantee recovery of fragments larger than the maximum cutoff size, we do not recommend to purify such fragments using QIAquick Kits.

The QIAEX II Kit can be used to extract DNA fragments up to 50 kb from agarose or polyacrylamide gels.

 

FAQ ID -756
How can I improve recoveries when using the QIAquick Kits?

Buffer PE did not contain ethanol

Ethanol must be added to Buffer PE (concentrate) before use. Repeat procedure with correctly prepared Buffer PE.

Inappropriate elution buffer

DNA will only be eluted efficiently in the presence of low-salt buffer (e.g., Buffer EB: 10 mM Tris·Cl, pH 8.5) or water. Elution efficiency is strongly dependent on the salt concentration and pH of the elution buffer. Contrary to adsorption, elution is most efficient under basic conditions and low salt concentrations. DNA is eluted with 50 or 30 µl of the provided Buffer EB (10 mM Tris·Cl, pH 8.5), or water. The maximum elution efficiency is achieved between pH 7.0 and 8.5. When using water to elute, make sure that the pH is within this range. In addition, DNA must be stored at –20°C when eluted with water since DNA may degrade in the absence of a buffering agent. Elution with TE (10 mM Tris·Cl, 1 mM EDTA, pH 8.0) is possible, but not recommended because EDTA may inhibit subsequent enzymatic reactions.

Elution buffer incorrectly dispensed

Add elution buffer to the center of the QIAquick membrane to ensure that the buffer completely covers the membrane. This is particularly important when using small elution volumes (30 µl).

FAQ ID -180
Can I use a centrifuge instead of vacuum when using the QIAquick 96 PCR Purification Kit?
Yes, you can use a QIAGEN Centrifuge with the QIAquick 96 PCR Purification Kit. Follow the Supplementary Protocol 'Spin procedure for purifying 2 x 96 PCR samples using the Plate Rotor 2 x 96, a special centrifuge, and the QIAquick 96 PCR Purification Kit.' Here's the link to the protocol.
FAQ ID -293
Do you have a protocol for purifying 2x96 PCR samples simultaneously with the QIAquick 96 PCR Purification Kit?

Yes, please follow the Supplementary Protocol 'Spin procedure for purifying the 2x96 PCR samples using the Plate Rotor 2x96, a special centrifuge and the QIAquick 96 PCR Purification Kit' (QQ01).  Please contact your local QIAGEN Technical Service for this protocol.

The protocol is for use with QIAGEN Centrifuges and the Plate Rotor 2 x 96.

FAQ ID -935
Do I have to remove the oil from my PCR reaction before using the QIAquick or MinElute PCR Purification Kit?
No - mineral oil will not affect the clean-up procedure with the QIAquick or MinElute PCR Purification Kit.
FAQ ID -575
Do you have protocols for multiple extractions of DNA fragments from agarose gels?

Yes, please follow the Supplementary Protocols 'High-throughput gel extractions using the QIAquick 96 PCR Purification Kit' (QQ03).  Please contact your local QIAGEN Technical Service for this protocol.

FAQ ID -944
Why does my DNA sample float out of the slot when loading it onto an agarose gel?

DNA fragments purified with the QIAGEN DNA Cleanup Systems, i.e., the QIAquick PCR Purification Kit, the MinElute Reaction Cleanup Kit, the QIAEX II Gel Extraction Kit etc. may float out of the loading wells of agarose gels due to residual ethanol carried over from the wash step with Buffer PE (despite the addtition of glycerol-containing loading buffer).

Use either of the following options to remove residual ethanol from the eluate:

  • re-purify the sample using a QIAquick-, or MinElute column, or QIAEX II resin
  • incubate the eluate at 56°C for 10 min to evaporate the ethanol
  • dry down the sample in a vacuum centrifuge, and resuspend the pellet in a small volume of sterile water
FAQ ID -205