Products
CGT Viral Vector Lysis Kit ist für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Dieses Produkt ist nicht für die Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Krankheit bestimmt.
Eigenschaften
- Die Komplettlösung für die AAV-Lyse, bestehend aus einem Kit und einem Protokoll, ermöglicht die Standardisierung und Qualitätskontrolle (QK) aktueller Workflows
- Konsistente und reproduzierbare Messung von Virustitern für verschiedene Serotypen (z. B. AAV-Serotypen)
- Kompletter Workflow kombiniert mit QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays und der genauen Messung von AAV-Titern auf dem QIAcuity Digital PCR System
Angaben zum Produkt
Das Adeno-assoziierte Virus ist ein häufig bei Gentherapieanwendungen eingesetzter viraler Vektor. Der Prozess der Generierung und Aufreinigung der viralen Vektoren erfordert jedoch eine präzise Qualitätskontrolle, um eine sichere und zuverlässige Dosierung im Rahmen klinischer Studien oder der Patientenversorgung zu gewährleisten. Die Möglichkeit zur genauen Quantifizierung von Vektortitern sowie zum Nachweis von Kontaminationen ist für sichere und wirksame AAV-basierte Gentherapien von zentraler Bedeutung.
Mit der Einführung des CGT Viral Vector Lysis Kit, das Reagenzien für entweder 100 oder 1000 Reaktionen enthält, bieten wir nun einen optimierten und standardisierten Workflow für die Lyse viraler Vektoren an, der eine genaue und präzise Bestimmung des Virustiters ermöglicht. Das Kit ist auch mit Adenoviren kompatibel.
Leistung
Wir bieten einen vollständigen Workflow von der Durchführung der AAV-Lyse bis hin zur Quantifizierung des Virustiters aus Zelllysaten. Das CGT Viral Vector Lysis Kit mit seiner verbesserten Formel ermöglicht eine konsistente, robuste und genaue Bestimmung des finalen Titers. Es wird zusammen mit QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays, QIAcuity Digital PCR System, QIAcuity Probe PCR Kit und QIAcuity Nanoplate 8.5K verwendet und bietet einen lückenlosen dPCR-Workflow, der mit der qPCR vergleichbar ist, aber eine absolute Quantifizierung der AAV-Vektorgenomkopien in Ihrer Probe ermöglicht.
Prinzip
Die Komplettlösung für die AAV-Lyse bietet:
- Standardisierung der AAV-Lyse mit deutlich einfacherer Implementierung von Standardarbeitsanweisungen (Standard Operating Procedure, SOPs) und QK
- Konsistente Quantifizierung von Titern
- Breiter Nachweisbereich zwischen 2,5 Kopien/µl und 15.000 Kopien/µl in der QIAcuity Nanoplate 8.5k
- Robustheit von < 10 % VK zwischen Bedienern und Assays
Das CGT Viral Vector Lysis Kit bietet nun in Verbindung mit den QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays und dem QIAcuity Probe PCR Kit zur Durchführung von entweder Singleplex- oder Multiplex-Reaktionen auf den QIAcuity Geräten einen vollständigen Virustiter-Workflow.
Das Prinzip der dPCR-Reaktion in Nanoplatten finden Sie hier beschrieben.
Verfahren
Das CGT Viral Vector Lysis Kit wird mit Reagenzien für 100 oder 1000 Reaktionen in zwei Packungen für AAV-Vektoren angeboten. Das Kit eignet sich für die Lyse von AAV2, AAV5, AAV6, AAV8 und AAV9. Die Lysate sind für QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays in Kombination mit dem QIAcuity Probe PCR Kit optimiert. Diese Assays ermöglichen sowohl Singleplex- als auch Multiplex-Zell- und Gentherapie-Anwendungen, einschließlich Messung des Virustiters und der Vektorkopienzahl. Das Kit enthält nicht die im Protokoll (im Abschnitt „Ressourcen“ unten zu finden) angegebenen Restriktionsenzyme (z. B. Hpall).
Anwendungen
Das CGT Viral Vector Lysis Kit wird für die Lyse von AAV und Adenoviren für eine Reihe von Anwendungen einschließlich der Messung der Genomtiter viraler Vektoren und der Vektorkopienzahl verwendet.
Ergänzende Daten und Abbildungen
ITR digestion improves the quantification of ITR and non-ITR targets
Two AAV2 samples were processed using the CGT Viral Vector Lysis Kit and quantified using the QIAcuity Digital PCR instrument with 8.5k Nanoplates and the CGT dPCR Assays. The CGT dPCR Assays were run in triplex reactions in the FAM, HEX and Cy5 channels. The samples were serially diluted in 6 steps from 15,000 copies/µL down to 2.5 copies/µL with an R2=1.0 on 8.5k Nanoplates (A, B). Each dilution was measured in technical triplicates. Quantifications were performed with (+) and without (–) restriction digest of the ITR regions. (A) For the titration of a purified AAV2 reference standard sample, the CGT dPCR assays targeting the CMV enhancer bGH polyA regions were used. The expected copies are based on an ITR estimate determined by qPCR measurements from the reference standard supplier and not directly comparable to dPCR measurements. (B) For the titration of the AAV2-SV40 harvest sample, the CGT dPCR Assays targeting the SV40 promoter, SV40 polyA and bGH polyA regions were used.
Ressourcen
Scientific Posters (3)
Kit Handbooks (1)
Brochures & Guides (1)
Application Notes (2)
Quick-Start Protocols (2)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
FAQ
Do you have to use a restriction enzyme to relieve ITR secondary structures and increase target accessibility?
Do you need to dilute the lysates before setting up the PCR mix?
Do I need to use Proteinase K in the CGT Viral Vector Lysis Kit? What is the recommended concentration?
Is the kit compatible with unpurified in-process samples?
Can I use the lysate from the CGT Viral Vector Lysis kit and combine it with another PCR system?
How do I know if the CGT dPCR assays are compatible with the sample DNA of interest?
Are the CGT dPCR assays also compatible with qPCR?
Is it possible to store the lysates? How can the lysates be stored?
Can I use MspI or HpaII restriction enzymes from other suppliers?
How many AAV genome copies can I load into the QIAcuity?
Can the CGT Viral Vector Lysis kit be used with assays of other suppliers or custom designed assays?
What is the recommended HpaII concentration?
Do you recommend storage of highly diluted AAV samples?