QIAGEN Plasmid Plus Kits

Zur schnellsten und praktischsten Aufreinigung von bis zu 10 mg Plasmid-DNA in Transfektionsqualität

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QIAGEN Plasmid Plus Midi Sample Kit (5)

Cat. No. / ID:   12941

QIAGEN Plasmid Plus Midi Sample Kit (5)
KitAccessories
QIAGEN Plasmid Plus Kit
QIAvac Holder
VacValves
Column type
Midi
Maxi
Mega
Giga
Preparations
5
25
100
QIAGEN Plasmid Plus Kits sind für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Diese Produkte sind nicht zur Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Erkrankung vorgesehen.
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Eigenschaften

  • Rasche Aufreinigung von bis zu 24 Proben
  • Schnelle Parallelverarbeitung auf Vakuumbasis
  • Geringe Elutionsvolumina für hochkonzentrierte DNA
  • Aufgrund des speziellen Waschpuffers sehr geringe Endotoxinkonzentrationen (<1 EU/μg)

Angaben zum Produkt

Die QIAGEN Plasmid Plus Kits erlauben eine ultraschnelle Aufreinigung im großen Maßstab bis zu

10 mg hochreiner Plasmid-DNA. Durch den Einsatz eines Vakuumverteilers können bis zu 24 Proben parallel aufgereinigt werden, wodurch sich der Zeitaufwand für die manuellen Schritte verringert. Geringe Elutionsvolumina ergeben hochkonzentrierte Plasmid-DNA zur direkten Weiterverarbeitung ohne Ethanolausfällung. Die QIAGEN Plasmid Plus Kits enthalten außerdem einen speziellen Waschpuffer zur Endotoxinreduktion. Die so gewonnene Plasmid-DNA eignet sich hervorragend für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich der Transfektion sensitiver Zelllinien.

Für optimale Ergebnisse wird empfohlen, dieses Produkt zusammen mit QIAvac 24 Plus zu verwenden.

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Leistung

Gleichbleibend hohe Qualität und Leistung

Die QIAGEN Plasmid Plus Technologie zeichnet sich durch die gleiche Leistung und Qualität aus wie die Anionenaustauschtechnologie. Die einzigartige Bindungschemie der QIAGEN Plasmid Plus Säulen stellt sicher, dass stets reine Plasmid-DNA isoliert wird. Den QIAGEN Plasmid Plus Kits liegen Protokolle für hohe Ausbeuten und zusätzliche Puffervolumina bei. Es werden Ausbeuten von bis zu 10 mg (Giga),
2 mg (Mega), 1 mg (Maxi) und 250 μg (Midi) hochreiner Plasmid-DNA erzielt, die frei von Verunreinigungen wie RNA, Proteinen und genomischer DNA ist (siehe Abbildungen „ QIAGEN Plasmid Plus Kits (QPP) gewährleisten hohe Ausbeuten“ und „ Analytisches Chromatogramm“).

Plasmid-DNA in Transfektionsqualität mit sehr geringen Endotoxinspiegeln

Endotoxine, auch bekannt als Lipopolysaccharide oder LPS, sind Bestandteile der Zellmembran gramnegativer Bakterien wie E. coli und werden während des Lyseschrittes der Plasmidaufreinigung freigesetzt. Endotoxine können eine unspezifische Aktivierung von Immunantworten auslösen und stellen beim Aufbau von Transfektionsexperimenten somit eine nicht beeinflussbare Variable dar, die das Resultat und die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse beeinflusst sowie deren Vergleich und Interpretation erschwert.

Der in den Kits enthaltene Endotoxin-Waschpuffer reduziert bakterielle Endotoxine auf Spiegel von üblicherweise unter 1 EU/μg DNA. (Der Endotoxingehalt kann je nach Wirtsstamm, Kulturmedium und Zelldichte abweichen. Bei sehr hoher Zelldichte kann der Endotoxinspiegel geringfügig höher ausfallen und bei 1–3 EU/μg DNA liegen). Dadurch eignet sich die Plasmid-DNA für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich der Transfektion sensitiver Zelllinien (siehe Abbildungen „ Endotoxinspiegel mit QIAGEN Plasmid Plus Kits“, „ Endotoxinspiegel bei verschiedenen Isolierungsverfahren“, und „ Effiziente Transfektion sensitiver Zelllinien“).

Abbildungen ansehen

Prinzip

Die QIAGEN Plasmid Plus Kits stellen die praktischste Methode zur Plasmidgewinnung in großem Maßstab dar. Der Aufbau und die einzigartige Bindungschemie der QIAGEN Plasmid Plus Säulen ermöglichen ein einfaches Binden-Waschen-Eluieren-Verfahren, das auf einer neuartigen Chemie basiert. Durch das Verfahren ermöglichen diese Kits äußerst schnelles Ansetzen im großen Maßstab — 20 Minuten für das Ansetzen der Maxi- und Midi-Präparationen. Die resultierende Plasmid-DNA ist hochkonzentriert und kann ohne weitere Ethanolausfällung sofort für nachfolgende Anwendungen genutzt werden. Daher eignet sich die Plasmid-DNA hervorragend für Anwendungen, die nur kleine Reaktionsvolumina zulassen.

Maximale Plasmidausbeute mit LyseBlue

Im Kit enthalten ist auch LyseBlue, ein optionaler Farbindikator, der die optimale Puffermischung sichtbar macht. Dadurch werden häufige Handhabungsfehler vermieden, die zu ineffizienter Zelllyse und unvollständiger Ausfällung von SDS, genomischer DNA und Zelltrümmern führen. Durch einfache Farbänderung stellt dieser einzigartige Pufferzusatz sicher, dass eine optimale Zelllyse und Neutralisierung erfolgt und die Ausbeute maximiert wird.

Spezifikationen

Merkmale
Plasmid Plus
Giga Kit
Plasmid Plus
Mega Kit
Plasmid Plus
Maxi Kit
Plasmid Plus
Midi Kit
AnwendungenTransfektion der meisten Zelllinien, Klonierung, enzymatische Restriktion,
In-vitro-Translation/-Transkription, Sequenzierung
Transfektion der meisten Zelllinien, Klonierung, enzymatische Restriktion,
In-vitro-Translation/-Transkription, Sequenzierung
Transfektion der meisten Zelllinien, Klonierung, enzymatische Restriktion,
In-vitro-Translation/-Transkription, Sequenzierung
Transfektion der meisten Zelllinien, Klonierung, enzymatische Restriktion,
In-vitro-Translation/-Transkription, Sequenzierung
Kulturvolumen/Ausgangsmaterial2500 ml Kulturvolumen500 ml Kulturvolumen50–200 ml Kulturvolumen25–50 ml Kulturvolumen
Finale DNA-Konzentration≥1 µg/µl≥1 µg/µl≥1 µg/µl≥1 µg/µl
PlasmidtypPlasmide, CosmidePlasmide, CosmidePlasmide, CosmidePlasmide, Cosmide
VerfahrenManuell (Zentrifugation und Vakuum), ParallelverarbeitungManuell (Zentrifugation und Vakuum), ParallelverarbeitungManuell (Zentrifugation und Vakuum), ParallelverarbeitungManuell (Zentrifugation und Vakuum), Parallelverarbeitung
Proben pro Lauf; Durchsatz1–12 Proben pro Lauf1–12 Proben pro Lauf1–24 Proben pro Lauf1–24 Proben pro Lauf
TechnologieFortschrittliche Silikatechnologie (nichtchaotroph), Endotoxin-ReduktionFortschrittliche Silikatechnologie (nichtchaotroph), Endotoxin-ReduktionFortschrittliche Silikatechnologie (nichtchaotroph), Endotoxin-ReduktionFortschrittliche Silikatechnologie (nichtchaotroph), Endotoxin-Reduktion
Dauer pro Lauf50 min40 min20 min20 min
Ausbeutebis zu 10 mgbis zu 2,5 mgbis zu 1 mgbis zu 250 µg

Verfahren

Die in den QIAGEN Plasmid Plus Kits enthaltenen QIAfilter-Kartuschen ermöglichen die schnelle Bereinigung von Lysaten. Das Beschicken der Säule mit dem bereinigten Lysat kann in einem Schritt erfolgen, was Zeit spart. Um das bereinigte Lysat und die nachfolgenden Waschpuffer durch die QIAGEN Plasmid Plus Säule zu leiten, kommt ein Vakuumverteiler (wie der QIAvac 24 Plus) zum Einsatz. Nach dem Waschen und Trocknen der Membran wird die hochkonzentrierte DNA durch Zentrifugation in geringen Volumina eluiert (siehe Flussdiagramm „ QIAGEN Plasmid Plus Verfahren“).

Abbildungen ansehen

Anwendungen

Die QIAGEN Plasmid Plus Kits liefern Plasmid-DNA in Transfektionsqualität, die sich für alle Anwendungen eignet, beispielsweise für:

  • Transfektion der meisten Zelllinien (z. B. sensitive Zelllinien wie Huh-7)
  • Restriktionsaufschluss
  • Klonierung
  • In-vitro-Transkription und -Translation
  • Sequenzierung

Ergänzende Daten und Abbildungen

Ressourcen

Technical Information (3)
Since QIAGEN launched the world’s first kit for purification of plasmid DNA, technologies have been developed to make plasmid DNA preparation even more convenient and reduce endotoxin levels in line with scientists’ needs in the laboratory. A lot of well-known companies have developed kits, and the choice of solutions available has never been greater. We compared popular advanced-technology kits to see their relative performance in speed, convenience of handling, yield and endotoxin levels.
Safety Data Sheets (1)
Brochures & Guides (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

Can I use your QIAvac 96 for extraction of the DNA using QIAamp 96 DNA Blood Kit?

We do not recommend using a vacuum manifold for DNA extraction using the QIAamp 96 DNA Blood Kit because:

  1. Viscosity of the lysates varies from sample to sample. Therefore, the wells of the QIAamp 96 plate are at great risk of clogging.
  2. Use of vacuum manifold would result in incomplete removal of ethanol and salts after washing with Buffer AW2. This will affect the purity and yield of samples.
FAQ ID -9158
How can I purchase replacement bottles, caps and tubing for my QIAvac Connecting System?

Please contact Nalgene for ordering. Part numbers from Nalgene:

-          10 liter waste container (Nalgene Heavy Duty Vacuum Carboy [PP], cat. no. 2226-0020)

-          20 liter waste container (Nalgene Heavy Duty Vacuum Carboy [PP], cat. no. 2226-0050)

-          Quick filling/venting closure (Nalgene, cat. no. 2158-0021) [lid]

-          Vacuum tubing (e.g., Nalgene 180 clear plastic vacuum tubing, cat. no.8000-0065)

FAQ ID -9156
Which QIAGEN plasmid preparation kits will contain LyseBlue Reagent?

LyseBlue reagent is provided in the following QIAGEN plasmid kits:

FAQ ID -865
3313 - What is the endotoxin level for the QIAGEN Plasmid Plus kits?

Endotoxin level of QIAGEN Plasmid Plus kits is in the range of 1 EU/µg DNA.

 

What is the composition of Buffer S3?
The composition of Buffer S3 is confidential. This buffer is a proprietary component of QIAGEN Plasmid Plus Kits and is an plays and important role in the alkaline lysis procedure.  Buffer S3 can only be purchased in combination with QIAGEN Plasmid Plus Kits.
FAQ ID -2788
Can the VacConnectors for your QIAvac 24 Plus be reused?

VacConnectors prevent cross-contamination and are meant to be disposed after single use.

FAQ ID -9152
Can the waste bottles of the QIAvac Connecting System be autoclaved?

Yes, the waste bottles of the QIAvac Connecting System can be autoclaved. However, please be aware that the plastic may change in color.

FAQ ID -9153
3299-Can Buffer ER from the Endofree Plasmid kits be used instead of the Buffer ETR in QIAGEN Plasmid Plus kits?

No, the two buffers cannot be interchanged.  The QIAGEN Plasmid Plus chemistry is not compatible with Buffer ER from the Endofree Plasmid kits.

Can I use your QIAvac 24 Plus for extraction of DNA from tissues using the DNeasy Blood & Tissue Kit?

We do not recommend using a vacuum manifold for DNA extraction of tissues using the DNeasy Blood & Tissue Kit. Viscosity of the lysates varies from sample to sample; therefore, the DNeasy mini spin columns are at great risk of clogging.

FAQ ID -9154
Can the QIAvac 24 Plus manifold be autoclaved?

We do not recommend to autoclave the QIAvac 24 Plus manifold. Doing so can result in damage to the device.

FAQ ID -9151
Can I use your QIAvac 96 for extraction of DNA using the DNeasy 96 Blood & Tissue Kit?

We do not recommend using a vacuum manifold for DNA extraction with the DNeasy 96 Blood & Tissue Kit because:

  1. Viscosity of the lysates varies from sample to sample. Therefore, the wells of the DNeasy 96 plate are at great risk of clogging.
  2. Use of vacuum manifold would result in incomplete removal of ethanol and salts after washing with Buffer AW2. This will affect the purity and yield of samples.
FAQ ID -9157
Is the waste tray for the QIAvac Multiwell and the QIAvac 96 the same?

QIAvac Multiwell can hold plates that conform to SBS plate standards, whereas the QIAvac 96 does not. Therefore, the waste tray for QIAvac Multiwell is not the same as for our QIAvac 96.

However, the waste tray from QIAvac Multiwell will fit the QIAvac 96, but not vice versa.

FAQ ID -9159
The gasket on my QIAvac 96 seems to have cracks in it. Do you have a replacement part available, so I can replace the gasket?
We do not have this part available for replacement. You will need to replace your vacuum manifold. Please contact your Sales representative for a price quote.
FAQ ID -9161
The gasket on my QIAvac Multiwell doesn’t seem to seal. Do you have a replacement part available, so I can replace the gasket?
FAQ ID -9160
Can I use your QIAvac 24 Plus for extraction of DNA from tissues using the DNeasy Blood & Tissue Kit?

We do not recommend using a vacuum manifold for DNA extraction of tissues using the QIAamp Blood & Tissue Kit. Viscosity of the lysates varies from sample to sample; therefore, the DNeasy mini spin columns are at great risk of clogging.

FAQ ID -9155
What is the composition of Buffer BB?
The composition of Buffer BB is confidential. Buffer BB is a proprietary component of QIAGEN Plasmid Plus Kits and functions as a binding buffer, adjusting the correct binding conditions after alkaline lysis, when performing the QIAGEN Plasmid Plus procedure. Buffer BB can only be purchased in combination with QIAGEN Plasmid Plus Kits and is not available separately.
FAQ ID -2790
What is the composition of Buffer ETR?
The composition of Buffer ETR is confidential. Buffer ETR is a proprietary component of QIAGEN Plasmid Plus Kits and functions as an endotoxin removal buffer. Buffer ETR can only be purchased in combination with QIAGEN Plasmid Plus Kits.
FAQ ID -2789
Where can I buy the filter for QIAvac Connecting System?

The filter for QIAvac Connecting System is from Pall (part no. 4400). This is the Acro 50 filter, 0.2 µm PTFE, 1/8 inch MNPT connection. Please visit www.pall.com

FAQ ID -9150