MinElute Reaction Cleanup Kit

Zur Reinigung von bis zu 5 µg DNA (70 bp bis 4 kb) aus enzymatischen Reaktionen

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MinElute Reaction Cleanup Kit (50)

Cat. No. / ID:   28204

50 MinElute Spin Columns, Puffer, Sammelröhrchen (2 ml)
Preparations
50
250
MinElute Reaction Cleanup Kit ist für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Dieses Produkt ist nicht für die Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Krankheit bestimmt.

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Eigenschaften

  • Sehr kleine Elutionsvolumen
  • Schnelles Verfahren und einfache Handhabung
  • Hohe, reproduzierbare Rückgewinnung
  • Gel-Ladefarbstoff für komfortable Probenanalyse

Angaben zum Produkt

Das MinElute Reaction Cleanup Kit enthält Spin-Säulen, Puffer und Sammelröhrchen für die Silikamembran-basierte Aufreinigung von DNA mit einer Größe von 70 bp – 4 kb aus enzymatischen Reaktionen. Die Spin-Säulen ermöglichen die Elution in sehr kleinen Volumen (bis zu 10 µl) und liefern hohe Ausbeuten an hochkonzentrierter DNA. Ein integrierter pH-Indikator erlaubt die einfache Bestimmung des optimalen pH-Werts für die DNA-Bindung an die Spin-Säule. Das Verfahren kann auf dem QIAcube Connect vollständig automatisiert werden. Die mit dem MinElute System aufgereinigten DNA-Fragmente können direkt für alle Anwendungen genutzt werden, einschließlich Sequenzierung, Microarray-Analyse, Ligation und Transformation, Restriktionsverdau, Markierung, Mikroinjektion, PCR und In-vitro-Transkription.

Für optimale Ergebnisse wird empfohlen, dieses Produkt zusammen mit QIAvac 24 Plus zu verwenden.

Leistung

Das MinElute Reaction Cleanup Kit ermöglicht die Reinigung von bis zu 5 µg DNA (70 bp bis 4 kb) aus enzymatischen Reaktionen und liefert eine hohe Ausbeute an DNA, die für eine Vielzahl von Anwendungen geeignet ist. Das Kit enthält Spin-Säulen für den Cleanup enzymatischer Reaktionen. Mithilfe einer Mikrozentrifuge oder eines Vakuumverteilers können schnell hohe Konzentrationen an DNA-Fragmenten (70 bp – 4 kb) erreicht werden. (DNA-Fragmente größer als 4 kb sollten mit dem QIAquick System aufgereinigt werden.)

Beispiele für Enzyme, die mit dem MinElute Reaction Cleanup Kit vollständig entfernt werden
Protein Molekulargewicht je Untereinheit des Enzyms (kDa)
DNA Polymerase I 109
Klenow-Fragment 62
Bovine (Kalb) intestinale alkalische Phosphatase 69
T4-DNA-Ligase 55
T4-Polynukleotidkinase 35
Terminale Transferase 32
DNase I 31
Restriktionsenzyme Variiert

Prinzip

MinElute Kits enthalten eine Silika-Membraneinheit für die Bindung von DNA in Hochsalzpuffer und die Elution mit Niedrigsalzpuffer oder Wasser. Durch die Aufreinigung werden Primer, Nukleotide, Enzyme, Mineralöl, Salze, Agarose, Ethidiumbromid und andere Verunreinigungen aus DNA-Proben entfernt. Die Silika-Membrantechnologie beseitigt die Probleme und Schwierigkeiten, die mit losen Harzen und Suspensionen verbunden sind. Spezialisierte Bindepuffer sind für spezifische Anwendungen optimiert und fördern die selektive Adsorption von DNA-Molekülen innerhalb bestimmter Größenbereiche.

Gel-Ladefarbstoff

Der mitgelieferte Gel-Ladefarbstoff ermöglicht eine schnellere und bequemere Verarbeitung und Analyse der Proben. Der GelPilot Loading Dye enthält drei Farbstoffe zur Nachverfolgung (Xylencyanol, Bromphenolblau und Orange G), um die Optimierung der Agarosegel-Laufzeit zu erleichtern und zu verhindern, dass kleinere DNA-Fragmente zu weit migrieren (siehe Abbildung „ GelPilot Loading Dye“).

Abbildungen ansehen

Verfahren

Das MinElute System nutzt ein einfaches Verfahren mit den Schritten „Binden-Waschen-Eluieren“ (siehe Flussdiagramm „ MinElute-Verfahren“). Der Bindepuffer wird direkt zur enzymatischen Reaktion hinzugefügt, und die Mischung wird auf die MinElute Spin Column aufgetragen. Zur einfachen Bestimmung des optimalen pH-Werts für die DNA-Bindung enthält der Bindepuffer einen pH-Indikator (siehe Abbildung  „pH-Indikatorfarbstoff“). Die Nukleinsäuren werden unter den Hochsalzbedingungen des Puffers an die Silikamembran adsorbiert. Verunreinigungen werden durch Waschen entfernt, und die reine DNA wird in einem kleinen Volumen des mitgelieferten Niedrigsalzpuffers oder mit Wasser eluiert und kann direkt für nachfolgende Anwendungen verwendet werden.

Handhabung

MinElute Spin Columns sind so konzipiert, dass sie zwei praktische Handhabungsoptionen bieten (siehe Flussdiagramm „MinElute-Verfahren“). Die Spin-Säulen passen in herkömmliche Tisch-Mikrozentrifugen und auf jeden Vakuumverteiler mit Luer-Anschlüssen, beispielsweise QIAvac 24 Plus und QIAvac 6S mit QIAvac Luer Adapters. Das MinElute Reaction Cleanup Kit kann, ebenso wie andere QIAGEN Kits auf Spin-Säulen-Basis, vollständig auf dem QIAcube Connect automatisiert werden, was eine höhere Produktivität und Standardisierung der Ergebnisse ermöglicht (siehe Abbildungen „Handhabungsoptionen für Spin-Säulen  A,  B,  C,  D und  E“ und „ QIAcube Connect“).

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Anwendungen

Die mit dem MinElute System aufgereinigten DNA-Fragmente lassen sich direkt für alle Anwendungen verwenden, darunter:

  • Sequenzierung
  • Microarray-Analyse
  • Ligation und Transformation
  • Restriktionsverdau
  • Markierung

Ergänzende Daten und Abbildungen

Specifications

FeaturesSpecifications
Binding capacity5 µg
Fragment size70 bp – 4 kb
ProcessingManual
Elution volume10 µl
Recovery: oligonucleotides dsDNARückgewinnung: Oligonukleotide, dsDNA
Removal <10mers 17–40mers dye terminator proteinsEntfernung von < 40meren
FormatRöhrchen
Sample type: applicationsDNA, Oligonukleotide: Enzymatische Reaktionen
TechnologySilika-Technologie

Publications

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J Bacteriol; 2006; 189 (4):1311-21 2006 Dec 1 PMID:17142402
Chromosome Conformation Capture Carbon Copy (5C): a massively parallel solution for mapping interactions between genomic elements.
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RAISE: a simple and novel method of generating random insertion and deletion mutations.
Fujii R; Kitaoka M; Hayashi K;
Nucleic Acids Res; 2006; 34 (4):e30 2006 Feb 21 PMID:16493137

FAQ

Are Buffer PB of the QIAquick PCR Purification Kit and Buffer QG of the QIAquick Gel Extraction Kit interchangeable?

Buffer PB of the QIAquick PCR Purification Kit cannot be used to extract DNA from agarose gels. However, Buffer QG of the QIAquick Gel Extraction Kit can be used to remove salt and proteins from enzymatic reactions by adding 3 volumes of Buffer QG and 1 volume of isopropanol to the reaction and proceeding with step 6 of the Gel Extraction Spin Protocol in the QIAquick Spin Handbook. See the QIAquick Spin Handbook for a list of reactions which can be cleaned up with the various QIAquick kits.

FAQ ID -786
I received a kit containing the MinElute columns; however, they were left out for a while and not stored at 2–8°C upon receipt. Can I still use them?

The MinElute spin columns included in the following kits should be stored at 2–8°C upon arrival: AllPrep DNA/RNA Micro, EpiTect Fast DNA Bisulfite, EpiTect Fast FFPE Bisulfite, EpiTect Fast LyseAll Bisulfite, EpiTect Plus DNA Bisulfite, EpiTect Plus FFPE Bisulfite, EpiTect Plus LyseAll Bisulfite, exoRNeasy Serum/plasma Maxi, exoRNeasy Serum/Plasma Midi, GeneRead DNA FFPE, GeneRead rRNA Depletion, GeneRead Size Selection, MinElute Gel Extraction, MinElute PCR Purification, MinElute Reaction Cleanup, miRNeasy FFPE, miRNeasy Micro, miRNeasy Serum/Plasma, QIAamp DNA FFPE, QIAamp DNA Investigator, QIAamp DNA Micro, QIAamp MinElute Media, QIAamp MinElute Virus Spin, QIAamp MinElute Virus Vacuum, RNeasy FFPE, RNeasy Micro, RNeasy Plus Micro.

Short-term storage (up to 4 weeks) at room temperature (15–25°C) does not affect the performance. However, for optimal performance and quality, storage temperature should not exceed 25°C.

FAQ ID - 3560
Are the columns of the MinElute Reaction Cleanup-, Gel Extraction-, and PCR Purification Kit identical?
Yes, and therefore they are interchangeable.
FAQ ID -581
Why does my DNA sample float out of the slot when loading it onto an agarose gel?

DNA fragments purified with the QIAGEN DNA Cleanup Systems, i.e., the QIAquick PCR Purification Kit, the MinElute Reaction Cleanup Kit, the QIAEX II Gel Extraction Kit etc. may float out of the loading wells of agarose gels due to residual ethanol carried over from the wash step with Buffer PE (despite the addtition of glycerol-containing loading buffer).

Use either of the following options to remove residual ethanol from the eluate:

  • re-purify the sample using a QIAquick-, or MinElute column, or QIAEX II resin
  • incubate the eluate at 56°C for 10 min to evaporate the ethanol
  • dry down the sample in a vacuum centrifuge, and resuspend the pellet in a small volume of sterile water
FAQ ID -205
Do you have information about the cleanup of single-stranded DNA (ssDNA) with QIAquick columns?

As a rule of thumb, single-stranded DNA binds to silica with approximately half the affinity of a double-stranded DNA fragment of the same length under the buffer conditions used in the QIAquick and MinElute Kits. Even though no systematic experimental data exists, we expect that recovery of ssDNA fragments of approximately 200 nucleotides and below will not be very efficient after cleanup using the QIAquick PCR Purification Kit or MinElute PCR Purification Kit. By comparison, it should be possible to purify fragments longer than 140 nucleotides using the QIAquick Gel Extraction Kit.

Note that recovery of single strand DNA is influenced to some degree also by factors such as base composition and secondary structure. It has to be determined empirically by the researcher if cleanup of single-stranded DNA with QIAquick columns yields satisfactory results.

FAQ ID -759
What is the composition of Buffer EB?

The composition of Buffer EB is:

  • 10 mM Tris-Cl, pH 8.5

Buffer EB is the elution buffer used in the QIAquick PCR, Gel Extraction, Nucleotide Removal Kits, and MinElute Kits for DNA cleanup, and the QIAprep Miniprep Kits for small-scale plasmid purification. The purified DNA can also be eluted in TE (10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA, pH 8.0), but the EDTA may inhibit subsequent enzymatic reactions.

FAQ ID -199
What is the small band below my fragment of interest on an agarose gel after DNA cleanup using QIAquick?

Occasionally, DNA fragments eluted from the silica matrix of QIAquick, MinElute or QIAEX II Kits will contain denatured single-stranded DNA (ssDNA), appearing as a smaller band on an analytical gel. Under certain conditions, chaotropic agents (present in all silica-based DNA purification methods) can denature DNA fragments. This is a rare event that may be influenced by sequence characteristics such as the presence of inverted repeats or A–T-rich stretches.

Because salt and buffering agents promote renaturation of DNA strands, the following tips are recommended:

  • use the eluted DNA to prepare your downstream enzymatic reaction, but omit the enzyme. Incubate the reaction mix at 95°C for 2 minutes to reanneal the ssDNA, and allow the tube to cool slowly to room temperature before adding the enzyme and proceeding
  • alternatively, the DNA can be eluted from the silica-gel membrane or resin in 10 mM Tris buffer containing 10 mM NaCl. However, the salt concentration of the eluate must then be taken into consideration in downstream applications.
FAQ ID -148
Can I buy QIAquick and MinElute columns separately?

The QIAquick Spin Columns (100) (cat. no. 28115) in the QIAquick PCR Purification, Gel Extraction, Nucleotide Removal and PCR & Gel Cleanup kits are also sold separately from the kits.

The MinElute columns in the MinElute PCR Purification, Gel Extraction and Reaction Cleanup kits are not sold separately.

We always provide extra buffers in our kits so you can scale up reactions, add extra washes or allow for spillage.

FAQ ID -2460