RT² First Strand Kit (12)

迅速で効率的な一本鎖cDNA合成とRNAサンプル中のゲノムDNA除去

Products

RT² First Strand Kit (12)は分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

RT² First Strand Kit (12)

Cat. No. / ID: 330401

For twelve 20 µl first strand cDNA synthesis reactions; Buffer GE (24 µl), 5x Buffer BC3 (48 µl), RE3 Reverse Transcriptase Mix (24 µl), Control P2 (12 µl), Nuclease-Free Water (1 ml)

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RT² First Strand Kit (50)

Cat. No. / ID: 330404

For fifty 20 µl first strand cDNA synthesis reactions; Buffer GE (100 µl), 5x Buffer BC3 (200 µl), RE3 Reverse Transcriptase Mix (100 µl), Control P2 (50 µl), Nuclease-Free Water (1 ml)

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特徴

迅速で効率的な一本鎖cDNA合成
ゲノム DNAを完全に除去
反応あたりわずか25 ngのトータルRNAで好結果を実現
合成したcDNAをリアルタイムPCRに即時使用可能
酵素阻害物質をモニターするための外因性RNAコントロール

製品詳細

RT² First Strand Kitは、効率的な一本鎖cDNA合成およびRNAサンプル中のゲノムDNA除去のために、迅速で簡便な手法を提供します。合成したcDNAは複数の遺伝子のリアルタイムPCR発現解析にすぐに使用できます。

原理

RT² First Strand Kitは、遺伝子発現アッセイに使用する一本鎖cDNAをmRNAから効率的に合成するための迅速で簡便な手法を提供します。

本キットは逆転写反応を行なう前に、RNAサンプルからゲノムDNAのコンタミを効率的に除去するための独自の操作が含まれています。Random hexamerとoligo-dTが逆転写反応で均一にプライマーとして作用し、逆転写酵素が最適な収量と長さを持つcDNA産物を合成します。操作に組み込まれている外因性RNAコントロールは、逆転写効率のモニタリングおよび酵素阻害物質のチェックに役立ちます。RT² HT First Strand Kitは、RT² Profiler PCR ArrayおよびRT² qPCR Primer Assayを用いたリアルタイムPCRベースの遺伝子発現解析用に至適化されていますが、市販の遺伝子発現解析アッセイにも使用できます。

操作手順

独自のBuffer GEとサンプルを混和し、サーマルサイクラーでインキュベートします。酵素とバッファーを追加後、サンプルをサーマルサイクラーを用いて逆転写します。逆転写されたcDNAは続くアプリケーションにすぐに使用できます。解析にはRT² Profiler PCR ArrayあるいはRT² qPCR Primer Assayをご使用になることをお勧めします。

RT² First Strand Kitは反応あたりわずか25 ngのトータルRNAあるいは最高5 µgのトータルRNAを用いてcDNAを合成します。しかし、最適なスタートサンプル量は目的の転写物の相対発現量により異なります。転写産物量が少ない場合はRNA量を増やし、多い場合はRNA量を減らします。RNAのインプット量が多いと直線性のあるダイナミックレンジにおけるpositive call（すなわち遺伝子発現検出）の数が増加します。

アプリケーション

RT² First Strand Kitを用いて合成したcDNAは、リアルタイムPCRによる複数遺伝子の発現解析で最適な結果を実現します。

リソース

Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.

For pathway-focused gene expression profiling using real-time RT-PCR

Simultaneously profile mRNA, miRNA and lncRNA using a simple, complete workflow

For pathway-focused gene expression analysis

Simultaneously profile mRNA, miRNA and lncRNA using a simple, complete workflow

For pathway-focused gene expression analysis

For pathway-focused gene expression profiling using real-time RT-PCR

FAQ

You need:

A RT² SYBR Green Mastermix that matches the qPCR instrument in your laboratory;
RT² qPCR Primer Assays for your target genes;
A Housekeeping gene RT² qPCR Primer Assay.

We also recommend using our RT² First Strand Kit for reverse transcription.

FAQ ID -2707

For best results, all RNA samples should be suspended in RNase-free water. Alternatively, RNase-free 1 mM sodium citrate (pH 6.5) or 10 mM Tris buffer (pH 7.0) may be used. Do not use DEPC-treated water, as most DEPC preparations are contaminated with molecules that are inhibitory to reverse transcription and/or PCR. For long-term storage, RNA preps may be stored at -70 ºC in RNase-free water, or the buffers listed above, or precipitated in ethanol or isopropanol. In order to avoid repeated freeze-thaw cycles, it is recommended that frozen RNA samples be stored as multiple, single-use aliquots.

FAQ ID -2659

Carry out all procedures in a "DNA-free" workspace (see FAQ 2654). Be sure to include any DNase treatment steps in the recommended RNA isolation procedure or treat RNA separately with RNase-free DNase followed by repurification using a spin-column based method. RNeasy Mini Kit can be easily combined with RNase-free DNase. Alternatively, kits like the RNeasy Plus Universal Tissue already include a DNA removal step. Be sure to double both the units of enzyme and the incubation time recommended by the RNase-free DNase manufacturer. To minimize DNA contamination in your RNA preparations, and avoid the need for supplemental DNase treatments, we recommend using the RT2 First Strand Kit, which includes a highly efficient genomic DNA elimination step before reverse transcription.

NOTE: Our Chemistries are not compatible with AMBION's Turbo DNA-Free Kits.

FAQ ID -2662

RT2 First Strand Kit (12)

迅速で効率的な一本鎖cDNA合成とRNAサンプル中のゲノムDNA除去

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RT2 First Strand Kit (12)

RT2 First Strand Kit (50)

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原理

操作手順

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