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JP-miRNA-1-2
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miScript Primer Assays
For quantification of mature miRNA using the miScript PCR System
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miScript HiSpec Buffer を用いてmature miRNA をcDNA へ選択的に変換
miScript HiSpec Buffer を用いた逆転写反応で、mature miRNA はpoly (A) ポリメラーゼによりポリアデニル化され、次に逆転写酵素とoligo-dT プライマーによりcDNA に変換される。その後cDNA は、リアルタイムPCR を用いたmature miRNA の定量に使用される。
miScript PCR System の構成
miScript PCR System はmiRNA およびmRNA をcDNA に変換、およびSYBR Green を用いたリアルタイムPCR での検出まで、全てのステップをカバーする3 つのコンポーネントで構成されている。
プライマーのアニーリングにおける特異性が増加
QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K
+
はDNA バックボーンのリン酸基(P
-
)に結合し、テンプレートへのプライマーアニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH
4
+
は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマーテンプレート結合に対する特異的な結合の比率が高く保たれる。
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