JP-miRNA-1-2

miScript HiSpec Buffer を用いた逆転写反応で、mature miRNA はpoly （A） ポリメラーゼによりポリアデニル化され、次に逆転写酵素とoligo-dT プライマーによりcDNA に変換される。その後cDNA は、リアルタイムPCR を用いたmature miRNA の定量に使用される。

miScript PCR System はmiRNA およびmRNA をcDNA に変換、およびSYBR Green を用いたリアルタイムPCR での検出まで、全てのステップをカバーする3 つのコンポーネントで構成されている。

QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K⁺ はDNA バックボーンのリン酸基（P^-）に結合し、テンプレートへのプライマーアニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH₄⁺ は、塩基（B）間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマーテンプレート結合に対する特異的な結合の比率が高く保たれる。